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构建细粒棘球绦虫钙网蛋白原核表达体系
目录
构建细粒棘球绦虫钙网蛋白原核表达体系（1）．．．．．．．．．．．．．．．．．．3
构建细粒棘球绦虫钙网蛋白原核表达体系的概述．．．．．．．．．．．．．．3
实验材料与方法．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．4
2.1细粒棘球绦虫供体的选择与培养．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．5
2.2基因克隆及质粒转化．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．6
2.3表达载体的设计与构建．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．8
2.4DNA分子克隆技术．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．9
2.5质粒DNA的提取与鉴定．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．11
表达系统优化与调控．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．12
3.1靶基因在原核表达系统中的稳定表达．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．13
3.2指导因子及其对钙网蛋白表达的影响研究．．．．．．．．．．．．．．．．．．14
3.3外源基因调控元件的筛选和设计．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．16
3.4环境因素对钙网蛋白表达的影响分析．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．17
测定钙网蛋白的产量与纯度．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．19
4.1生物化学测定法．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．20
4.2免疫学方法．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．20
4.3高效液相色谱法．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．22
结果讨论．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．23
5.1表达体系的构建情况．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．24
5.2蛋白质产量与质量．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．24
5.3表达系统中影响钙网蛋白表达的因素探讨．．．．．．．．．．．．．．．．．．25
5.4相关实验结果的分析．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．26
结论与展望．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．27
6.1主要结论．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．28
6.2展望与建议．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．28
构建细粒棘球绦虫钙网蛋白原核表达体系（2）．．．．．．．．．．．．．．．．．30
一、内容综述．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．30
1.1棘球绦虫研究背景．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．31
1.2钙网蛋白研究现状．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．32
1.3原核表达体系概述．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．33
1.4研究目的与价值．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．34
二、细粒棘球绦虫钙网蛋白基因克隆．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．35
2.1钙网蛋白基因序列获取．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．36
2.2引物设计与合成．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．37
2.3PCR扩增及产物鉴定．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．41
三、原核表达载体的构建与转化．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．43
3.1表达载体的选择与设计．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．44
3.2重组表达载体的构建．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．45
3.3转化宿主细胞的选择及转化过程．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．45
四、细粒棘球绦虫钙网蛋白原核表达体系的建立与
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