高三生物二轮微专题【知识精研精讲】基因工程5种“基因重组技术“ .pptx

基因工程之-------

5种“基因重组的技术;;①目的基因：;01;限制酶的选择注意点;图中甲、乙、丁Ti质粒均不宜选取，而丙Ti质粒宜选取(假设切割目的基因的限制酶为XbaⅠ和SacⅠ)。;有的时候目的基因两侧并没有较好的限制酶的酶切位点，所以需要在利用PCR技术扩增目的基因时在引物设计上注意，适当地在引物的5端带有限制酶酶切序列。;例题1：左图是获取用于构建基因表达载体的含人生长激素基因的DNA片段(DNA复制子链延伸方向是5→3,转录方向为左→右)示意图，右图是所用质粒示意图，其上的Ampr表示青霉素抗性基因，Tett表示四环素抗性基因。有关限制酶的识别序列和酶切位点见表。;01;02;2.(2024·天津宁河区高三一模)蓝细菌中的ictB蛋白能高效转运和浓缩CO2，从而提高细胞光合速率。我国科学家构建了叶片特异性启动子Cab(叶绿;(1)为使重组DNA分子能定向插入T－DNA中，可用PCR的方法??重组DNA分子两端添加限制酶识别序列，据图可知，M端添加的序列所对应的限制酶是________，N端添加的序列所对应的限制酶是________。添加了限制酶识别序列的重组DNA分子与Ti质粒的重组过程共需要______种酶。;_____________________________________。检测应选用的植物器官是______，原因是________________________________________________

_________________。;02;EASY克隆主要原理是将胸腺嘧啶通过磷酸键与拓扑异构酶第274位酪氨酸结合，使拓扑异构酶和载体偶联在一起。当偶联载体与PCR产物进行连接时，PCR产物3端羟基撞击载体与酶之间的磷酸键，使其断裂，拓扑异构酶利用断键释放的能量发挥连接功能，将片段连接到载体上，同时酶从载体上脱落。这项技术的广泛应用主要得益于拓扑异构酶本身的特性，它连接速度非常快，所以EASY法构建表达载体会更简便，反应更快速，连接更高效。这项技术多作为情境出现。;03;3.(2024·潍坊高三二模)A蛋白是某种激素合成的关键酶。为鉴定该激素合成的部位及生理作用，某科研团队利用无缝克隆技术将A蛋白结合蛋白基因(P基因)与β-葡萄糖苷酸酶基因(GUS基因)融合，构建

A蛋白检测探针，通过农杆菌转化法导;1;1;1;1;(2).In－Fusion技术

In－Fusion技术即无缝克隆和组装技术，是一种新型的、快速、简洁的克隆方法，可以在质粒的任何位点进行一个或多个目标DNA片段的插入。具体原理：;(1)质粒构建过程：①采用酶切或者PCR扩增方法将载体线性化；②使用设计好的引物进行目的DNA片段的PCR扩增；③反应体系内形成重组质粒。

(2)与传统酶切、酶连相比的优势：①位点选择灵活，在载体任意位置;1.(2024·信阳高三期末)在构建基因表达载体时，传统方法常受限于限制酶识别序列。科研人员研发了新的DNA重组方法：In－Fusion技术。该技术关键是要在目的基因两端构建与线性化质粒末端相同的DNA序列(即同源序列)，然后用In－Fusion酶

处理，使同源序列形成黏性末端，

最终形成的重组质粒会在受体细

胞内形成完整的重组序列，主要

操作过程如图所示。;下列叙述错误的是

A.推测In－Fusion酶的作用是识别

同源序列、形成黏性末端、连接

磷酸二酯键

B.质粒A端和B端的序列不同，可防止目的基因与质粒反向连接及自身环化

C.形成重组质粒时，如果温度远高于50℃，黏性末端的碱基更容易互补

配对

D.该技术对目的基因进行PCR，需要经历3次循环才能得到两端含引物1和

引物2的目的基因;03;特点：就操作时间而言，Golden?Gate?克隆是最简单的克隆方法之一，因为消化和连接可以在一个30分钟的反应中完成。目的载体和入口载体置于一个含有IIS型酶和连接酶的管中。连接产物的形成是不可逆的，因为该构建体不保留酶识别位点。因此，连接过程的效率接近100%。;03;03;03;03;;(3)①同向LoxP：如果两个LoxP位点位于一条DNA链上，且方向相同，Cre重组酶能有效切除两个LoxP位点间的序列，仅保留一个LoxP。

②反向LoxP：如果两个LoxP位点位于一条DNA链上，但方向相反，Cre重组酶能导致两个LoxP位点间的序列倒位。;04;04;04;2.(2024·泰安高三一模)Cre/LoxP系统能实现特定基因的敲除(如图1)。把几种荧光蛋白基因和Cre酶能识别并切割的序列(LoxP1和LoxP2)串在一起，构建表达载体T(如图2)。部分荧光蛋白基因会被Cre酶随机“剪掉”，且两个LoxP1之间或两个LoxP2之间的基因，最多会被Cre