高三生物二轮复习：PCR 技术的热点考法.pptx

二轮复习;;;;3’;3’;3’;;2.PCR定点突变技术——大引物;2.PCR定点突变技术——大引物;是在PCR扩增反应体系中加入荧光基团，通过对扩增反应中每一个循环产物荧光信号的实时检测，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析。常用的荧光探针如TaqMan探针，其两端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团。在PCR扩增过程中，Taq酶将探针酶切降解，使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离，从而荧光监测系统可接收到荧光信号，实现荧光信号的累积与PCR产物形成完全同步?。

;1.反转录

?(1)提取RNA?：首先从组织或细胞中提取总RNA。

?(2)逆转录?：使用逆转录酶（ReverseTranscriptase）将RNA反转录成cDNA（互补DNA）。这一步需要引物（如Oligo(dT)或随机引物）来启动反应，生成cDNA。

2.PCR扩增

?(1)模板准备?：以cDNA为模板，使用DNA聚合酶和特定的引物进行PCR扩增。

?(2)扩增过程?：PCR通过循环的变性、退火和延伸步骤，将cDNA数量指数级增加，从而获得足够数量的DNA产物用于后续分析。

3.检测

使用荧光染料或比色剂等方法检测PCR产物的数量，从而确定RNA样本中特定基因的表达水平。;5.反向PCR测定未知DNA区域;5.反向PCR测定未知DNA区域;5.反向PCR测定未知DNA区域;6.巢式PCR;6.巢式PCR;7.不对称PCR;7.不对称PCR