紫外可见分光光度计.ppt

★同一种物质对不同波长光的吸光度不同。吸光度最大处对应的波长称为最大吸收波长λmax。★同一物质的浓度不同时，光吸收曲线形状相同，最大吸收波长不变，只是相应的吸收度大小不同。★物质不同，其分子结构不同，则吸收光谱曲线不同，最大吸收波长也不同。所以可以根据吸收光谱曲线对物质进行定性鉴定和定量分析。第30页，共74页，星期日，2025年，2月5日物质对光的吸收特征，可以用吸收曲线来描述。以入射光的波长λ为横坐标，溶液的吸光度A为纵坐标作图，得到的曲线即为该物质的紫外-可见吸收曲线或吸收光谱。吸收曲线表明了物质对不同波长的入射光的吸收能力。第31页，共74页，星期日，2025年，2月5日(一)单波长分光光度法1.单组分物质的定量分析（1）比较法：在相同的条件下配制样品溶液和标准溶液（与待测组分的浓度近似），在相同的实验条件和最大波长处分别测得吸光度Ax和As，然后进行比较，求得样品溶液中待测组分的浓度，Cx=Cs×(Ax/As)。（2）标准曲线法：首先配制一系列已知浓度的标准溶液，在最大吸收波长处分别测得标准溶液的吸光度，然后，做A-c的校正曲线（理想的曲线应为经过原点的直线）。在完全相同的条件下测出试液的吸光度，并从曲线上求得相应的试液的浓度。第32页，共74页，星期日，2025年，2月5日ACCxAx标准曲线/工作曲线制作根据光的吸收定律:吸光度与吸光物质的含量成正比，这是光度法进行定量的基础，标准曲线就是根据这一原理制作的。第33页，共74页，星期日，2025年，2月5日2.多组分物质的定量分析根据吸光度加和性原理，对于两种或两种以上吸光组分的混合物的定量分析，可不需要分离而直接测得。A?XY?1?2第34页，共74页，星期日，2025年，2月5日根据加合性原则，解联立方程法A?XY?1?2k为物质的特征参数，可通过配制标准溶液测得。解联立方程，可求得Cx,CyACs(x)第35页，共74页，星期日，2025年，2月5日（二）双波长分光光度法不需空白溶液作参比；但需要两个单色器获得两束单色光(λ1和λ2)；以参比波长λ1处的吸光度Aλ1作为参比，来消除干扰。对于多组分混合物、浑浊试样分析及存在背景干扰或共存组分吸收干扰的情况，利用双波长分光光度法灵敏度、选择性、测量精密度等方面都比单波长法有所提高。第36页，共74页，星期日，2025年，2月5日ΔＡ＝Aλ2－Aλ1＝（kλ2－kλ1)bc两波长处测得的吸光度差值ΔＡ与待测组分浓度成正比。kλ1和kλ2分别表示待测组分在λ1和λ2处的摩尔吸光系数。第37页，共74页，星期日，2025年，2月5日关键问题：选择波长组合λ1、λ2的基本要求：⑴选定的波长λ1和λ2处干扰组分应具有相同吸光度。测得的吸光度差ΔＡ只与待测组分的浓度呈线性关系，而与干扰组分无关。⑵在选定的两个波长λ1和λ2处待测组分的吸光度应具有足够大的差值。第38页，共74页，星期日，2025年，2月5日三、示差分光光度法常规的分光光度法是采用空白溶液作参比，对于待测组分含量较高时，相对误差较大，这时需采用示差分光光度法。示差法是以浓度稍低于待测溶液浓度的标准溶液作参比，测定待测溶液的吸光度值。第39页，共74页，星期日，2025年，2月5日设：待测溶液浓度为cx，标准溶液浓度为cs(cscx)。则：Ax=kbcxAs=kbcsΔＡ＝Ａx－Ａs=kb(cx－cs）=kbΔc测得的吸光度相当于普通法中待测溶液与标准溶液的吸光度之差ΔＡ。吸光度与Δc呈直线关系。由标准曲线上查得相应的Δc值，则待测溶液浓度Cx=Cs+Δc第40页，共74页，星期日，2025年，2月5日示差分光光度法适用于那些要求相对误差更低一些的高含量物质的测定和痕量测定。因为普通分光光度法测量高组分含量时，常常偏离朗伯-比尔定律。即使不偏离，对于浓度很高和很稀的溶液来说，由于一般吸收光度分析的相对误差较大（约百分之几)，故不适用。第41页，共74页，星期日，2025年，2月5日四、动力学分光光度法利用反应速率与反应产物、催化剂浓度间的定量关系，通过测量吸光度对待测组分进行定量分析的方法，称为动力学分光光度法。第42页，共74页，星期日，2025年，2月5日1.在土壤和植物分析中的应用氮、磷、钙、镁