高三生物二轮复习课件PCR中的引物.pptx

生物技术与工程

基因工程

;新旧教材对比;;

高中生物二轮复习微专题·PCR引物

PCR技术中“引物”归类分析;;1.1DNA的复制需要引物

DNA聚合酶只能催化脱氧核糖核苷酸加至已有核酸链的游离3-羟基上，而不能使脱氧核糖核苷酸自身发生聚合，即它需要引物链的存在。引物是一小段DNA或RNA，它能与DNA母链的一段碱基互补配对。细胞内DNA复制以RNA作引物，从新合成的冈崎片段上发现含有一短暂存在的小的RNA片段附着在5端这一事实，可说明DNA复制时需要RNA引物，这些引物长5~10bp，现已知RNA引物的合成是由一种特殊的RNA合成酶——引物酶所催化的。PCR反应以DNA作引物。;DNA的复制需要引物

例1（2011年江苏卷）请回答基因工程方面的有关问题;PCR反应体系中含有热稳定DNA聚合酶，下面的表达式不能正确反映DNA聚合酶的功能，这是因为______________。;引物的作用

DNA聚合酶不能从头开始合成DNA，只能从3端延伸DNA链。当引物与DNA母链通过碱基互补配对结合后，DNA聚合酶就能从引物的3端开始延伸DNA链。不同的引物可结合不同的目的基因并进行扩增。

例2.请回答基因工程方面的有关问题：

（1）若用PCR技术扩增psy基因和crtI基因，需要分别在不同的PCR扩增仪中加入__种引物，其作用是_________________________。

（2）在利用PCR技术扩增R（抗旱）或r基因过程中，利用_______可寻找抗旱基因的位置并进行扩增。

（3）通过PCR技术可在总cDNA中专一性的扩增出Wx基因的cDNA,原因是

_________________________。

;?;例1.引物的结合方向（二轮复习资料P124）

如图为X蛋白的部分基因序列，所示序列为引物结合的部分，据图分析：;例2.引物的修饰（二轮复习资料P124）

(1)(2022·山东，25节选)某种类型的白血病由蛋白P引发，蛋白UBC可使P被蛋白酶识别并降解，药物A可通过影响这一过程对该病起到治疗作用。为探索药物A治疗该病的机理，需构建重组载体以获得融合蛋白FLAG－P和FLAG－PΔ。PΔ是缺失特定氨基酸序列的P，FLAG是一种短肽，连接在P或PΔ的氨基端，使融合蛋白能与含有FLAG抗体的介质结合，但不影响P或PΔ的功能。

①为构建重组载体，需先设计引物，通过PCR特??性扩增P基因。用于扩增P基因的引物需满足的条件是____________________________________________

_____________，为使PCR产物能被限制酶切割，需在引物上添加相应的限制酶识别序列，该限制酶识别序列应添加在引物的______(填“3′端”或“5′端”)。;②PCR扩增得到的P基因经酶切连接插入载体后，与编码FLAG的序列形成一个融合基因，如图所示，其中“ATGTGCA”为P基因编码链起始序列。将该重组载体导入细胞后，融合基因转录出的mRNA序列正确，翻译出的融合蛋白中FLAG的氨基酸序列正确，但P基因对应的氨基酸序列与P不同。;据图分析，出现该问题的原因是___________________________________

_______________________________________________________________。修改扩增P基因时使用的带有EcoRⅠ识别序列的引物来解决该问题，具体修改方案是__________________________________________。;引物的处理

由于引物延伸从3端开始，3端不能进行任何修饰，引物5端对扩增特异性影响不大，因此，可给予修饰而不影响扩增特异性。引物5端修饰包括加酶切位点、标记生物素、荧光等。为了使经PCR扩增的目的基因能与运载体正常结合，需要在2种引物的5端添加不同的限制酶的识别序列。在2种引物的5端上添加不同的限制酶识别序列，是为了保证目的基因定向插入运载体并可避免目的基因自身环化。;3.引物的选择和互补链的判断;例9.下图是为了扩增某目的基因所用引物的分布示意图（图8），已知引物组合1和2、3和4可扩增相关的目的基因，则引物1、3与______（填α链或β链）形成碱基互补配对关系。;4.引物的数量计算(二论复习资料P124)

(1)如图：一个DNA分子n次扩增，则：

①子代DNA分子中等长链的

DNA分子数为________个；

②子代DNA分子中不等长链

的DNA分子数为_____个；

③子代DNA分子中含模板链

DNA分子数为_____个；

④子代DNA分子中含引物A(或B