高三二轮复习生物：基因工程课件.pptx

;一、重组DNA技术的基本工具

1.限制酶：（1）来源及原因?（2）作用?（3）限制酶切割目的基因时需切割几次?产生几个末端?断开几个磷酸二酯键?

2.DNA连接酶：（1）作用?（2）分类?来源?作用的差别?

3.载体：（1）载体的种类?（2）载体的作用?（3）质粒是什么?（4）作为载体必须具备的条件是什么？

;1.基因工程

(1)概念理解;(2)理论基础;磷酸二酯;基本工具;知能必备;高考调频考点——限制酶选取原则;;;;;;考点一基因工程的基本工具;;11题图;作业生物二轮复习大本

125页真题引领3

127页1、3题

128页10题

第二张卷子;;第一步：目的基因的筛选与获取，目的基因的获取方法?

第二步：基因表达载体的构建

1.基因表达载体的构建目的?

2.5个组成？标记基因的作用？复制原点的作用？启动子：本质？位置作用？什么

是诱导型启动子？终止子：本质？位置？作用？

3.构建过程？(3条)双酶切（两种不同的限制酶）分别切割目的基因和质粒，优势？

第三步：将目的基因导入受体细胞

1.转化的概念？导入的方法、受体细胞？

2.农杆菌转化法过程？(注意两次拼接、两次导入)、原理？

第四步：目的基因的检测与鉴定

1.检测与鉴定目的？分子水平检测什么？检测方法有？

2.个体生物学水平的鉴定方法？

;(2)构建目的基因表达载体。科研人员从构建的GFP突变基因文库中提取目的基因（均为突变基因）构建表达载体，其模式图如下所示（箭头为GFP突变基因的转录方向）。图中①为；②为，其作用是；

图中氨苄青霉素抗性基因是一种标记基因，其作用是。;项目;细胞类型;;;八省联考;关键能力提升：据图分析抗虫棉的培育过程。

(1)该过程中的目的基因是，载体是。

(2)基因工程中，往往使用两种限制酶切割

目的基因，这样做的原因是什么？;三、实验：DNA的粗提取与鉴定

1.DNA粗提取与鉴定的原理？2.不能选择哺乳动物成熟的红细胞的原因？

3.研磨后过滤的方案是？

4.4℃冰箱放置几分钟的作用？搅拌时应轻缓、并沿一个方向的原因？

5.鉴定试剂？

四、PCR及电泳鉴定

1.DNA体外扩增的原理？DNA片段电泳鉴定原理？

2.DNA片段扩增的具体过程。

3.PCR：名称、原理、仪器、条件、过程?缓冲溶液中添加Mg2+的作用?用PCR可以扩增mRNA吗？引物的作用？DNA复制的方向?引物是什么？引物的种类？为何需要2种引物？扩增n次需要多少个引物：至少需经过几次循环才能分离得到所需要的DNA区段？鉴定PCR产物的方法？;8．（2024·湖南）现发现某植物群体中有一植株，推测其Rubisco的编码基因发生突变所致。Rubisco由两个基因（包括1个核基因和1个叶绿体基因）编码，这两个基因及两端的DNA序列已知。拟以该突变体的叶片组织为实验材料，以测序的方式确定突变位点。

写出关键实验步骤：

①_____________；

②______________；

③________________；

④基因测序；

⑤_________________。;;;;;[方法总结]

1.设计引物的主要原则

①引物长度通常为20~30个核苷酸,可防止随机结合。

②两种引物之间不能互补配对

③引物自身不能环化

④为构建合适酶切位点,常常需要在2种引物的5端添加不同的限制酶的识别序列。;PCR基础知识回顾;PCR基础知识回顾;PCR基础知识回顾;(1)接种上述重组乙肝疫苗不会在人体中产生乙肝病毒，原因是。

(2)制备重组乙肝疫苗时，需要利用重组表达载体将乙肝病毒表面抗原基因（目的基因）导入酵母细胞中表达。重组表达载体中通常含有抗生素抗性基因，抗生素抗性基因的作用是。

能识别载体中的启动子并驱动目的基因转录的酶是。