菌落总数与大肠菌群数测定.ppt

媒染第30页，共43页，星期日，2025年，2月5日脱色第31页，共43页，星期日，2025年，2月5日复染第32页，共43页，星期日，2025年，2月5日革兰氏染色阴性革兰氏染色阳性革兰染色法第33页，共43页，星期日，2025年，2月5日复发酵器材与试剂培养24小时后的伊红美兰平板、酒精灯、接种环、复发酵管第34页，共43页，星期日，2025年，2月5日大肠菌群数测定实验步骤3.复发酵（1）选取鉴定为无芽孢G-杆菌的菌落1-3个（2）接种至10ml乳糖蛋白胨培养液（3）培养：37℃，24h（4）观察指标：产酸，产气第35页，共43页，星期日，2025年，2月5日液体接种第36页，共43页，星期日，2025年，2月5日复发酵复发酵阳性结果，培养基变成黄色，小倒管内有气体产生第37页，共43页，星期日，2025年，2月5日大肠菌群数测定注意事项：1.无菌操作2.吸管使用3.洗去染液的方法4.显微镜保养5.液体接种第38页，共43页，星期日，2025年，2月5日MPN法原理MPN法（MostProbableNumberMethod）目的：对某种细菌进行选择性计数核心思想：泊松分布实施方法：多次稀释直至无菌，每个稀释度分别接种若干培养管，根据阳性管数估算MPN值第39页，共43页，星期日，2025年，2月5日MPN法原理MPN法（MostProbableNumberMethod）1.细菌进入发酵管的概率近似服从泊松分布:P(x=k)=e-x×xk/k!x:细菌浓度，k:进入发酵管的细菌数2.若在n管发酵中，令接种水样量为Vi，阳性管数为Pi，阴性管数为Qi，则该检验结果发生的概率为：其中C为常系数V为总水样量，x为细菌个数第40页，共43页，星期日，2025年，2月5日MPN法原理3.当y(x)?max，X?MPN4.由于y(x)为单极值函数，令dy/dx=0,即5.解此方程，得x=MPN6.该方程为超越方程，一般采用数值法求近似解7.日常实验时采用查表法推算MPN值。8.表格在教材第260-261页。第41页，共43页，星期日，2025年，2月5日谢谢！第42页，共43页，星期日，2025年，2月5日感谢大家观看第43页，共43页，星期日，2025年，2月5日****************************第1页，共43页，星期日，2025年，2月5日主要内容菌落总数测定大肠菌群测定MPN法原理（拓展内容）第2页，共43页，星期日，2025年，2月5日菌落总数测定掌握菌落总数测定方法实验原理 不同稀释度的样品，营养琼脂培养基，36℃，48h（水产品30℃，72h），菌落数第3页，共43页，星期日，2025年，2月5日菌落总数测定器材与试剂：样品，无菌生理盐水，平板计数琼脂培养基，1ml吸管，培养皿第4页，共43页，星期日，2025年，2月5日菌落总数测定第5页，共43页，星期日，2025年，2月5日倾注培养第6页，共43页，星期日，2025年，2月5日培养结果第7页，共43页，星期日，2025年，2月5日菌落总数测定实验步骤5.菌落计数：肉眼观察，可用放大镜，可标记必要时分区计数，菌落成片者作废计算方法某稀释度的菌落数：两平板菌落数取平均值选择菌落数在30-300之间的稀释度（1）仅有一个稀释度在此范围：菌落数×稀释倍数第8页，共43页，星期日，2025年，2月5日菌落总数测定计算方法：（2）有两个稀释度在30-300之间菌落数之比2，选较小值菌落数之比2，取平均值（3）所有稀释度均300取稀释倍数最大者（4）所有稀释度均30取稀释倍数最小者（5）没有任何稀释度在30-300之间选最接近该范围者结果单位：CFU/ml（g）第9页，共43页，星期日，2025年，2月