高三二轮复习生物：PCR技术及应用课件.pptx

微专题：PCR技术及应用;1.(2024·山东,25节选)(1)用PCR技术从大豆基因组DNA中扩增目标基因L时，所用的引物越短，引物特异性越（填“高”或“低”）。

2.(2022·山东,25节选)(1)为构建重组载体，需先设计引物,通过PCR特异性扩增P基因。用于扩增P基因的引物需满足的条件是_____。为使PCR产物能被限制酶切割，需在引物上添加相应的限制酶识别序列,该限制酶识别序列应添加在引物的_____(填“3’端”或“5端”)。

3.(2024·黑吉辽，7节选)关于采用琼脂糖凝胶电泳鉴定PCR产物的实验，下列叙述正确的是()

4.(2024·山东,25节选)(2)PCR产物完全酶切后的电泳结果如图丙所示。据图可判断选用的限制酶是，其中纯合的突变植株是（填序号）。

5.(2023·山东,25节选)(2)构建重组质粒后，为了确定J基因连接到质粒中且插入方向正确，需进行PCR检测，若仅用一对引物，应选择图甲中的引物___________。

6.(2021·山东,25节选)(1)为将扩增后的产物定向插入载体指导荧光蛋白基因表达，需在引物末端添加限制酶识别序列。据图可知，在F1～F7末(2021·山东,25节选)端添加的序列所对应的限制酶是____，在R末端添加的序列所对应的限制酶是_____

7.(2024·江苏·高考真题)用PCR技术筛选成功导入pET-SOD-ELP50（融合基因）的大肠杆菌，应选用的一对引物是。;【学习目标】;考点一：PCR技术的引物;【典例1】

(1)(2020.山东.25节选)通过PCR技术可在总cDNA中专一性的扩增出Wx基因的cDNA，原因是________________________________________________

__________________________________________。;发夹结构（引物自身互补）;;请先思考：PCR过程中，如果只提供一对引物中的一种，一个DNA分子复制n次后，最终得到的产物是____________;

【典例3】(不定项选择)(2025·浙江·模拟预测)研究者利用图中质粒构建重组DNA分子并导入大肠杆菌，获得生产胰岛素的工程菌，成为生产胰岛素的“活工厂”。;【拓展延伸】反向PCR是一种通过已知序列设计引物对未知序列进行扩增的技术，其过程如下图所示。下列叙述正确的是（????）

A．应选择引物1和引物4进行PCR扩增

B．设计的引物中GC碱基含量越高，复性的温度越低

C．PCR过程中将温度调至72℃??目的是使引物与模板链通过碱基互补配对结合

D．整个过程需用到限制酶、DNA连接酶、耐高温DNA聚合酶及逆转录酶;考点二：PCR产物鉴定—;【典例4】(2024·黑吉辽，7)关于采用琼脂糖凝胶电泳鉴定PCR产物的实验，下列叙述正确的是（）

A.琼脂糖凝胶浓度的选择需考虑待分离DNA片段的大小

B.凝胶载样缓冲液中指示剂的作用是指示DNA分子的具体位置

C.在同一电场作用下，DNA片段越长，向负极迁移速率越快

D.琼脂糖凝胶中的DNA分子可在紫光灯下被检测出来;【迁移应用】(2025江苏南通·模拟)血凝素基因（HA）编码的血凝素是构成流感病毒囊膜纤突的主要成分。成熟的血凝素包含HA1和HA2两个亚单位，其中HA1含有病毒与受体相互作用的位点。IgGFc

基因片段（长度为717bp）编码

人IgG抗体中的一段小肽，常作

为融合蛋白标签。科研人员尝试

;【迁移应用】(2025江苏南通·模拟)血凝素基因（HA）编码的血凝素是构成流感病毒囊膜纤突的主要成分。成熟的血凝素包含HA1和HA2两个亚单位，其中HA1含有病毒与受体相互作用的位点。IgGFc基因片段（长度为717bp）编码人IgG抗体中的一段小肽，常作为融合蛋白标签。科研

人员尝试构建IL-2SS/HA1/IgGFc;必威体育精装版版本教材;(4)若目的基因与质粒A正向连接，HAl基因转录时的模板链是图中的引物____在PCR时延伸而成。;考点三：PCR技术的综合应用;【典例6】(2023·江苏·高考真题改编)为

了将某纳米抗体和绿色荧光蛋白基因融合

表达，运用重组酶技术构建质粒，如图1

所示。请回答下列问题：

;;(3)将转化后的大肠杆菌在含有抗生素的培养基筛选后，为了验证平板上菌落中的质粒是否符合设计，用不同菌落的质粒为模板，用引物___________进行了PCR扩增，质粒P1~P4的扩增产物电泳结果如图2．根据图中结果判断，可以舍弃的质粒有。;【迁移应用】如图为利用重叠延伸PCR的方法在蛋白a基因中部引入定点突变(A/T碱基对变为G/C)的过程。