免疫学实验技术与应用.pptxVIP

免疫学实验技术与应用欢迎学习免疫学实验技术与应用课程。本课程将带领您深入了解免疫学实验的核心技术和实践应用。作者：

课程概述1掌握技术原理理解免疫学实验技术的基本原理和操作规范，建立科学的实验思维。2培养实践能力通过实验操作培养动手能力，学会分析实验结果和排除实验故障。3促进创新思维将免疫学理论与实验技术融会贯通，启发科研创新思路。4奠定职业基础为未来在科研和临床领域的工作打下坚实的专业基础。

免疫学基础回顾免疫系统组成免疫系统包括免疫器官、免疫细胞和免疫分子。它们共同构成人体防御网络。先天性免疫先天性免疫是与生俱来的防御系统。它包括物理屏障、吞噬细胞和补体系统。适应性免疫适应性免疫是后天获得的特异性防御系统。其核心是T细胞和B细胞介导的细胞免疫和体液免疫。

免疫学实验技术分类免疫标记技术利用特异性抗体对目标分子进行标记，实现定性或定量检测。1组织学技术用于研究免疫细胞在组织中的分布和功能状态。2电泳技术分离和鉴定不同大小和电荷的蛋白质或核酸分子。3细胞分析技术研究免疫细胞的表型和功能特征。4

抗原-抗体反应基础1反应应用诊断、治疗和研究2反应动力学速率、平衡和可逆性3亲和力结合强度和稳定性4特异性结合抗原表位与抗体结合位抗原-抗体反应是免疫学实验的基础原理。它基于分子间的特异性识别和非共价结合。高亲和力和特异性使抗体成为理想的生物识别工具。

凝集反应原理理解当多价抗原与抗体结合时，形成可见的凝集物。这是最古老的免疫学技术之一。类型掌握直接凝集（如血型鉴定）和间接凝集（如乳胶凝集实验）两种常见类型。操作实践正确配制稀释液，观察凝集现象，确保阳性和阴性对照设置合理。结果判读学会区分阳性和阴性结果，理解干扰因素对结果的影响。

沉淀反应环状沉淀反应在试管中形成抗原-抗体复合物环带。用于测定抗原或抗体的相对含量。双向免疫扩散Ouchterlony技术。抗原和抗体在琼脂凝胶中扩散并形成沉淀线。免疫电泳结合电泳和免疫沉淀原理。可分析复杂混合物中的特定蛋白质。实验注意事项控制温度、湿度及反应时间。避免琼脂凝胶干燥或污染。

免疫标记技术概述1荧光标记使用荧光染料（如FITC、PE）标记抗体。通过荧光显微镜或流式细胞仪检测。2酶标记使用酶（如HRP、AP）标记抗体。酶催化底物产生有色产物。3放射性同位素标记使用125I等同位素标记。高灵敏度但有放射安全风险。4生物素-亲和素系统利用生物素与亲和素的高亲和力。可放大信号，提高灵敏度。

免疫荧光技术（IF）直接法荧光素直接标记特异性抗体。操作简单但信号较弱。间接法使用荧光标记的二抗识别未标记的一抗。信号放大但背景可能增高。样品制备细胞固定、膜通透和封闭非特异性位点是关键步骤。结果分析观察荧光分布位置和强度。设置阳性和阴性对照很重要。

酶联免疫吸附测定（ELISA）夹心法ELISA两种识别不同表位的抗体夹持抗原。高度特异，适用于复杂样品检测。直接法ELISA酶标记的特异性抗体直接检测吸附在板上的抗原。操作简便。间接法ELISA使用酶标记的二抗识别与抗原结合的一抗。可增强信号。竞争法ELISA样品中抗原与标记抗原竞争抗体结合位点。适用于小分子检测。

免疫印迹技术（WesternBlot）1结果分析根据分子量和信号强度判读目标蛋白表达情况2抗体孵育一抗特异性识别靶蛋白，二抗提供检测信号3转膜将蛋白从凝胶转移到膜上以便抗体检测4电泳分离根据分子量在SDS凝胶中分离蛋白混合物5样品制备组织或细胞裂解，提取总蛋白

免疫组织化学（IHC）免疫组织化学技术用于检测组织切片中特定抗原的分布。它结合了组织学和免疫学原理。该技术广泛应用于病理诊断、肿瘤分型和研究细胞分子在组织中的表达和定位。

流式细胞术（FCM）100K+细胞分析量每次实验可分析大量细胞，提供统计学意义的数据。15+参数同时检测现代流式细胞仪可同时检测多个荧光参数，实现多维分析。99%细胞分选纯度高性能流式细胞分选仪可获得超高纯度的目标细胞群体。30+临床应用年限流式细胞术已在临床免疫学和血液学领域应用数十年。

抗体制备技术免疫动物选择合适动物注射抗原1免疫应答动物产生特异性抗体2抗体采集采集血清或脾细胞3抗体纯化分离特异性抗体4抗体应用用于实验或临床测试5

抗体纯化技术盐析法利用不同蛋白质在不同盐浓度下的溶解度差异进行初步分离。操作简单但特异性低。离子交换层析基于蛋白质表面电荷与固定相离子基团的相互作用。可有效分离具有不同等电点的蛋白质。亲和层析利用蛋白A/G与抗体Fc区的特异性结合。可获得高纯度抗体，是最常用的抗体纯化方法。

细胞分离技术技术方法原理优点缺点密度梯度离心基于细胞密度差异可处理大量样品纯度一般免疫磁珠分选抗体-磁珠识别表面标志物快速简便成本较高流式细胞分选荧光标记后单细胞分选纯度极高设备昂贵粘附分离基于细胞粘附特性简单经济特异性低

T