象耳豆根结线虫ace1和vab19基因功能研究.pdf

摘要

Meloidogyneenterolobii

象耳豆根结线虫（）在全球范围内已经成为危害农作物的

一种植物病原线虫，该线虫致病力强，寄主范围广，种群扩散迅速，给农作物造成

毁灭性危害，其2龄幼虫侵染寄主植物后导致植物的侧根或者须根上形成根结，随

着时间的推移根结慢慢增大并且容易腐烂。同时造成地上植株发育不良，植株矮小、

黄化，发病严重时，植株全株枯死。随着现代农业的发展，设施大棚和温室在生产

上的应用不断增多，导致土壤温度上升，象耳豆根结线虫向内地蔓延速度不断加快，

已受到国内外研究者的广泛关注。本文对采集的带病植株中的根结线虫进行了鉴定，

Meloidogyneincognita

根据南方根结线虫（）基因组的分析结果，筛选出两个可能影

响线虫生长发育及其致病性的基因：乙酰胆碱酯酶基因Me-ace-1和骨架蛋白基因

Me-vab-192

。从象耳豆根结线虫龄幼虫转录组数据库中有哪些信誉好的足球投注网站到了基因序列，并分别

对其进行了生物信息学分析以及RNAi效应分析。

1.使用解剖针从带病植株根部直接刨出根结线虫，并且将卵块泡在水中，在28℃

2

培养箱中孵化，孵化的龄幼虫接种进番茄植株进行扩大繁殖。运用分子生物学技

DNA18S28S

术对其进行鉴定，提取基因组后，使用根结线虫和通用引物进行基因

扩增，产物经纯化、连接、转化、测序后，比对为象耳豆根结线虫。设计象耳豆根

结线虫特异引物进行扩增，进一步确认为象耳豆根结线虫。收集不同龄期的根结线

虫进行形态学观察，并且制作雌虫会阴花纹切片进行观察，观察结果与象耳豆根结

线虫的形态特征相吻合，最终将其鉴定为象耳豆根结线虫。

2.2ace-1vab-19

从象耳豆根结线虫龄幼虫转录组数据库中有哪些信誉好的足球投注网站出了和基因序

列。对这两个基因的氨基酸序列进行生物信息学分析，分析结果显示，Me-ace-1基

因ORF为858bp，编码285个氨基酸，通过网站预测出它的分子量为32.06KD，等

7.60155-2581103Abhydrolase_3

电点为，并且在位氨基酸包含个个氨基酸左右的

结构域。Me-vab-19基因ORF为1158bp，编码385个氨基酸，分子量为42.69KD，

等电点为4.90，包含3个30个氨基酸左右的ANK结构域，分别位于200-230位、

272-301位以及305-333位。聚类分析发现，象耳豆根结线虫的这两个基因均与植物

qRT-PCRMe-ace-12

寄生线虫的亲缘关系最近。结果表明，在龄幼虫时期表达量最

高，在其他龄期均显示下降趋势；Me-vab-19在成年雌虫时期表达量最高，其次是2

I

龄幼虫时期，但没有显著差异。推测这两个基因可能在象耳豆根结线虫2龄幼虫侵

染寄主植物时发挥作用。

3.Me-ace-1Me-vab-19dsRNA2

通过体外浸泡和的方法对象耳豆根结线虫龄幼

虫进行RNAi。与对照组相比，经过Me-ace-1dsRNA和Me-vab-19dsRNA浸泡后的

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