动物细胞原代培养.pptxVIP

实验一动物细胞原代培养

实验目的01

掌握动物细胞培养的无

02菌操作技术。

掌握动物细胞原代培养

的基本方法。04

组织块贴壁培养法是将切成小块的

组织贴附在适宜的支持物上，细胞

从组织块边缘游离、生长，形成单

实验原理层细胞即为原代培养细胞。

0103

0204

原代培养(primaryculture)是指取分散细胞培养法是通过酶消化或机

自体内的新鲜组织、细胞，在体外械分离，使组织分散成单个细胞，

条件下生长至传代之前细胞培养阶

然后开始首次培养的方法。

段，是细胞培养的最初和必经阶段。

原代培养方法主要有组织块贴壁培

养法和分散细胞培养法。

•三、实验材料

•1．动物材料

出生2周内的大鼠。

•2．实验试剂

•（1）D-Hank’s液

•（2）75%乙醇

•（3）0.05%Ⅳ型胶原酶液

•（4）DMEM培养基

•（5）小牛血清

•（6）双抗溶液

•（7）0.4%台盼蓝染液

实验器材

超净工作台、倒置相差显微镜、CO2培养箱、水浴锅、离心

机、眼科剪、眼科镊、移液器及枪头、培养皿、烧杯、细胞

培养瓶、吸管、离心管、血球计数板、载玻片、盖玻片、

200目不锈钢筛网、酒精灯、75％酒精棉球、记号笔等。

四、实验方法与步骤

取1只大鼠，颈椎脱臼法处死，浸入75%乙醇消毒。

将小鼠置于超净台中的大培养皿中，背部朝上，用75%酒精棉球擦拭其整个

背部皮肤。

用眼科镊提起小鼠腰部皮肤，用眼科剪横向剪开皮肤，稍用力将剪开的皮肤拉

向两端，暴露腰部。更换解剖器械，剪开腰部的肌肉、被膜，取出肾脏，置于

培养皿中。

更换解剖器械，去除肾被膜，去除肾盂，用含有双抗的D-Hanks液清洗3次，

剪取肾皮质部分，移入小烧杯中，加入少量D-Hanks液，剪成1mm3左右的

组织块。用D-Hanks液清洗3次，吸去上清液，尽量去除血细胞。

向组织块中加入0.05%Ⅳ型胶原酶用血球