酶活性测定的主要影响因素及控制.ppt

2.3底物启动模式与样品启动模式双试剂与单试剂酶促反应时间进程曲线第30页，共58页，星期日，2025年，2月5日2.3需要注意某些双试剂剂型是基于试剂稳定性考虑，并没有将底物单独作为第二试剂，也起不到消除内源性干扰的作用。第31页，共58页，星期日，2025年，2月5日2.4正向反应与逆向反应一般根据测定底物或产物的难易程度来决定。除原则上选择对底物亲和力大，酶转换率高的方向外，还应考虑内源性干扰、底物价格和稳定性等诸多因素。例如，CK的测定普遍采用逆向反应，因其逆向反应是正向反应的6倍，而且受影响因素少。第32页，共58页，星期日，2025年，2月5日2.4正向反应与逆向反应LDH测定的选择目前尚有争议。国内多采用正向反应（L→P），与IFCC在2001年发表的操作手册一致。正向反应有利于LD1的活性表达，同时试剂成本低廉，稳定性好。国外常用方法曾是逆向反应（P→L），反应速度是正向的3倍，成本也较低。第33页，共58页，星期日，2025年，2月5日2.5检测试剂的干扰作用试剂酶的污染。组织匀浆中往往含有NADH-细胞色素C还原酶，它将干扰各种还原酶的测定。底物的非酶反应。很多硝基酚的酯类衍生物在水溶液中不稳定，放置一段时间可自行水解释放出硝基酚。如碱性磷酸酶（ALP）测定解决的方法是通过试剂空白管检出并加以校正。选购IFCC或中华检验学会推荐的方法和质量好的试剂。第34页，共58页，星期日，2025年，2月5日3.仪器因素的影响及控制第35页，共58页，星期日，2025年，2月5日3仪器的影响因素加样系统加样的准确性、重复性和携带污染；反应系统反应杯的形状、表面和携带污染；反应杯和反应槽温度的准确性、波动范围；搅拌和清洗机构的效果和携带污染；检测系统光度计的准确性、重复性、线性范围和杂散光等均会造成结果的偏差。第36页，共58页，星期日，2025年，2月5日3仪器影响因素的控制在日常工作中，除常规做好仪器和设备的正确使用和维护外，重点应注意仪器的校准问题。第37页，共58页，星期日，2025年，2月5日3.1酶活性浓度的计算公式摩尔吸光系数?和系数K均为常数，?和K受仪器诸多因素的影响，如波长的准确性、半波宽的大小、比色池光径及磨损与清洁度、温控的准确性、加样系统状况等。?和K可用校准物定期校正。第38页，共58页，星期日，2025年，2月5日3.2校准物可用作酶活性测定用的校准物分两类。一类是产物的基准物质，如对硝基酚、对硝基苯胺等，用于校准仪器的?值（摩尔吸光系数）。另一类称酶校准物（Enzymecalibrator），多是用人血清或动物血清作介质，与测定标本比较接近，用于校准仪器的K值（酶活性浓度定量系数）。第39页，共58页，星期日，2025年，2月5日3.2校准物国际上已经有经IFCC认可的CRM酶参考物。各试剂供应商所提供的酶校正物的定值应可溯源至CRM酶参考物。常规工作一般选用用于常规实验室的工作校准品。目前，临床常规实验室应用较多的是德国宝灵曼公司的校准品(c.f.a.s)。第40页，共58页，星期日，2025年，2月5日3.3ε的校准（340nm波长）NAD(P)H是酶活性测定中常用的指示辅酶。在340nm?的NAD(P)H的?，可用葡萄糖己糖激酶法实测、计算其实测的?。NAD(P)H的ε为6220。如果6000ε6600为不合格，则需找维修部检查。注：干涉滤光片者需校准，光栅式可直接使用文献或试剂盒说明书的数值。第41页，共58页，星期日，2025年，2月5日第1页，共58页，星期日，2025年，2月5日酶（enzyme）酶的应用临床诊断酶学产生至今已有100年的历史。用于诊断的酶类已超过100多种，常用的数十种。酶测定约占目前临床化学总工作量的1/4到1/2。酶的概念是一种由活细胞产生，具有高度专一性、高度催化活性的特殊蛋白质，又称为生物催化剂。酶的测定方法分为绝对定量法和相对定量法两大类，以后者为主。酶催化化学反应的能力称为酶活性（activity）。酶活性浓度的测定受许多因素的影响。第2页，共58页，星期日，2025年，2月5日酶活性浓度测定的主要影响因素1.标本及标本采集和处理因素2.试剂及方法学因素3.仪器因素的影响4.测定条件与参数设置第3页，共58页，星期日，2025年，2月5日1.标本及标本采集和处理因素

的影响及控制第4页，共58页，星期日，2025年，2月5日1.标本及采集和处理的影响因素1.1溶血1.2抗凝剂1.3