DB37T 2121-2012 尿素中多肽含量的测定　.docxVIP

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DB37

山东省地方标准DB37/T2121—2012

尿素中多肽含量的测定

2012-05-07发布2012-06-01实施

山东省质量技术监督局发布

I

DB37/T2121—2012

前言

本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。

本标准由山东省化工行业标准化技术委员会提出并归口。

本标准起草单位：山东省化工研究院、中化山东肥业有限公司。

本标准主要起草人：崔爱红、王瑞菲、李琳、祈新宇、于朋玲、刘丙勇、饶飞、邱娟。

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DB37/T2121—2012

尿素中多肽含量的测定

1范围

本标准规定了尿素中多肽含量高效液相色谱测定的试验方法。本标准适用于尿素中多肽含量的测定。

本标准的检出限为3μg。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

HG/T2843化肥产品化学分析常用标准滴定溶液、标准溶液、试剂溶液和指示剂溶液

3方法原理

将尿素中的多肽（聚天门冬氨酸）水解成天门冬氨酸，在碱性条件下，天门冬氨酸与异硫氰酸苯酯反应，采用反相液相色谱法进行多肽含量（以天门冬氨酸计）的测定，外标法定量。

4仪器设备

仪器设备包括：

a)高效液相色谱仪：带紫外检测器；

b)超声波清洗器；

c)压力蒸汽器：额定压力为0.14Mpa；

d)恒温水浴锅；

e)旋转蒸发仪；

f)分析天平：感量0.0001g；

g)水解管：50mL；

h)针头过滤器：带0.45μm有机相过滤膜。

5试剂和溶液

5.1本标准所用试剂在没有注明其他要求时，均使用分析纯试剂；色谱流动相的配制使用GB/T6682规定的一级水，其他使用三级水。

5.2试验中所用制剂及制品、试剂溶液在没有注明其他要求时，均按HG/T2843的规定制备。5.3试剂和溶液主要包括：

a)甲醇：色谱纯；

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DB37/T2121—2012

b)三乙胺；

c)正己烷；

d)盐酸；

e)异硫氰酸苯酯-甲醇溶液：移取1.2mL异硫氰酸苯酯，溶于100mL甲醇中。此溶液室温下可保存一周；

f)盐酸溶液：c（HCl）＝0.1mol/L；

g)氨水溶液：1+4；

h)乙酸铵溶液：c（CH3COONH4）＝0.05mol/L，pH＝6.0～6.5。称取1.93g乙酸铵加入500mL水溶解，用氨水溶液调节pH为6.0～6.5，经0.45μm滤膜过滤，于超声波清洗器中超声脱气

30min；

i)苯酚：称取100g苯酚于250mL蒸馏烧瓶中，连接旋转蒸发仪，调节真空度约为0.5MPa，加热蒸馏，收集馏出的苯酚，现用现蒸；

j)天门冬氨酸标准储备液（1.0mg/mL）：称取天门冬氨酸0.1g（精确到0.0002g）于50mL烧杯中，加盐酸溶液溶解，转移至100mL容量瓶中，用盐酸溶液（定容至刻度。此标准储备液于4℃下可保存两周；

k)天门冬氨酸标准工作溶液（100μg/mL）：移取5.00mL天门冬氨酸标准储备液，置于50mL容量瓶中，用盐酸溶液定容至刻度，摇匀，现用现配。

6分析步骤

6.1天门冬氨酸标准系列的制备

按表1所示，分别移取0.00mL，0.10mL，0.20mL，0.40mL，0.60mL，0.80mL天门冬氨酸标准工作溶液置于6个10mL具塞试管中，加盐酸溶液至1.00mL，加入1mL三乙胺、1.5mL异硫氰酸苯酯-甲醇溶液，加甲醇至5mL，置于50℃水浴中加热反应1h。冷却至室温，加入3mL正己烷，振摇2min，静置10min后弃去上层溶液，再加入3mL正己烷，振摇2min，静置10min后弃去上层溶液，用注射器取下层溶液1mL，用针头过滤器过滤，备用。

表1天门冬氨酸标准系列

天门冬氨酸标准溶液体积，mL

对应的天门冬氨酸质量，μg

0.00a

0

0.10

10

0.20

20

0.40

40

0.60

60

0.80

80

a试剂空白溶液

6.2试验溶液的制备

称取试样2g～3g[准确至0.0002g，以含多肽（以天门冬氨酸计）1mg～2mg为宜]，置于水解管中，加入