血液检验 8.2017-2014级检验本科红细胞检验2 学习资料.ppt

L-2000高效液相色谱仪HPLC3.抗碱血红蛋白检测原理胎儿血红蛋白（HbF）具有比HbA更强的抗碱作用，将待检的溶血液与一定量的NaOH溶液混合，作用1分钟后加入半饱和硫酸铵中止碱性反应。HbF抗碱变性作用强，没有变性存在于上清液中，HbA变性沉淀，取上清于540nm处测定吸光度，检测出HbF的浓度。此试验也称为碱变性试验，其检测的是抗碱血红蛋白，除HbF外，HbBarts和部分HbH也具有抗碱能力，需通过电泳鉴别。参考值成人：1.0-3.1％新生儿：55-85％临床评价绝对增多：珠蛋白生成障碍性贫血时HbF增加，重型者达30％～90％，中间型常为5％～30％，轻型者小于5％。遗传性胎儿血红蛋白持续综合征患者，HbF可高达100％。相对增多：可见于骨髓纤维化、白血病、浆细胞瘤等恶性疾病及再生障碍性贫血、PNH、卟啉病等。生理性增多：见于孕妇和新生儿。4.HbF酸洗脱法检测原理HbF具有抗碱和抗酸能力比HbA强。将血涂片于酸性缓冲液孵育，含HbF的红细胞不被酸洗脱，可被伊红染成红色，而含HbA的红细胞均被酸洗脱，不能被伊红着色。参考值正常血片中含HbF的着色红细胞：成人0.02(2%);新生儿0.55-0.85(55%-85%)，以后渐渐下降;孕妇可有轻度增加。临床评价珠蛋白合成障碍性贫血着色细胞增加，重型患者大多数红细胞染成红色，轻型患者可见少数染成红色的细胞。遗传性胎儿血红蛋白持续综合征全部红细胞均染为红色。5.异丙醇沉淀试验原理不稳定血红蛋白较正常血红蛋白更易裂解在异丙醇这种能降低血红蛋白分子内部氢键的非极性溶液中，不稳定血红蛋白更快的沉淀通过观察血红蛋白液在异丙醇中的沉淀现象对不稳定血红蛋白进行筛检。参考值正常人血红蛋白液为阴性（30分钟内不沉淀）临床评价不稳定血红蛋白存在时，常于5分钟时出现沉淀,20分钟开始出现绒毛状沉淀。血液中含有较多HbF、HbH、HbE时也可出现阳性结果。本试验特异性差，为不稳定血红蛋白的过筛试验。注意事项：

（1）异丙醇溶液浓度（17％）及温度（37℃）应严格控制，PH只不得低于7.2；

（2）血红蛋白浓度应控制在70-130g/L之间，最好为100g/L；

（3）血红蛋白液需新鲜配置，久置可变为高铁血红蛋白，造成假阳性。6.热变性试验

Heatinstabilitytest原理热变性试验是根据不稳定血红蛋白比正常血红蛋白更容易遇热变性，观察血红蛋白液在50℃时作用2小时，是否出现沉淀，对不稳定血红蛋白进行筛检。参考值阴性：2小时不会或仅有微细沉淀，热沉淀的血红蛋白5%。临床评价血红蛋白沉淀率增加，说明不稳定血红蛋白存在。HbF、HbH、HbE含量增加时，G6PD缺陷和α珠蛋白生成障碍性贫血者，结果均偏高。7.聚丙烯酰胺凝胶电泳检测原理尿素或对氯汞苯甲酸能破坏血红蛋白的空间结构，血红蛋白的珠蛋白可被裂解成肽链亚单位，通过聚丙烯酰铵凝胶电泳可分离出各肽链区带。参考值正常血红蛋白HbA裂解后出现β、HbA、HbA2、和α四条带。临床评价本试验若有异常血红蛋白肽链的区带出现，表示有异常血红蛋白存在。对珠蛋白生成障碍性贫血的诊断和鉴别有参考价值。8.血红蛋白基因PCR技术检测原理一般PCR产物用DNA印迹法、酶切法或直接测序等方法进行检测。可检测出异常血红蛋白基因的存在，是纯合子还是杂合子，基因缺陷的部位等。临床评价在分子水平上进行血红蛋白病的诊断和研究。（七）陈发性血红蛋白尿症的检验酸化血清溶血试验蔗糖溶血试验蛇毒因子溶血试验1.酸化血清溶血试验

acidified-serumhemolysistest原理阵发性睡眠性血红蛋白尿症（paroxymalnocturnalhemoglobinuriaPNH）患者体内存在对补体敏感的红细胞。酸化血清溶血试验也称Hamtest，即红细胞在酸性（pH6.4-6.5）的正常血清中孵育,补体被激活，PNH红细胞破坏而产生溶血。而正常红细胞不被溶解，无溶血现象。参考值正常人阴性临床评价本试验阳性主要见于PNH，特异性强，是诊断PNH最基本简易的确诊试验。但敏感性较差，30%患者呈阴性。某些自身免疫性溶血性贫血发作严重时可呈阳性。**第七章

红细胞检验的基本方法南方医科大学检验系孙德华主要内容红细胞酶缺陷的检验血红蛋白异常的检验陈发性睡眠性血红蛋白尿症的检验免疫性溶血性贫血的检验(五)红细胞酶缺陷的检验高铁血红蛋白还原试验变性珠蛋白小体生成试验葡萄糖-6-磷酸脱氢酶荧光斑点试验和活性测定丙酮酸激酶荧光斑点试验和活性测定谷胱甘肽还