DNA的蛋白质技术 课件.pptVIP

专题整合;2;提取DNA利用的是DNA、RNA、蛋白质和脂质的理化性质的差异。具体地说，DNA与其他物质在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同，再通过冷酒精进一步去除其他杂质。另外DNA对高温和洗涤剂的耐受性较高，不易被破坏。鉴定时可采用二苯胺试剂沸水浴加热呈蓝色来判断DNA的存在。;提取与分离蛋白质是根据蛋白质的分子形状和大小，所带电荷的性质和多少，溶解度、吸附性质以及对其他分子的亲和力等理化性质，将不同种类的蛋白质分离开。凝胶色谱法可以将相对分子质量不同的蛋白质有效分离。

DNA与蛋白质的提取技术比较

电泳法可将带有不同电荷的蛋白质分离。;;PCR技术与凝胶色谱法的比较;DNA粗提取与鉴定中不同试剂的用途

及原理比较;;大家学习辛苦了，还是要坚持;【典例1】下表是关于DNA粗提取与鉴定实验中所使用的材料、操作及其作用的表述，正确的是 ()。;解析在DNA的粗提取与鉴定实验中，柠檬酸钠可以防止血液凝固；鸡血中加入蒸馏水可以使细胞膜和核膜破裂；DNA在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同，在质量浓度为0.14mol/LNaCl溶液中溶解度最低，有利于DNA析出；DNA不溶于酒精，可以获得较纯的DNA；DNA遇二苯胺(水浴加热)产生蓝色反应。

答案C;(1)为避免外源DNA等因素的污染，PCR实验中使用的微量离心管、枪头、缓冲液以及蒸馏水等在使用前必须进行高压灭菌。

(2)在微量离心管中添加反应成分时，每吸取一种试剂后，移液器上的枪头必须更换。

(3)所有的成分都加入后，盖严离心管的盖子，用手指轻轻弹击管的侧壁，混匀后离心处理，使反应液集中在离心管底部。;(4)PCR实验中应注意各种反应成分的用量，用量不当、漏加成分、PCR程序设置不当等，均有可能导致DNA片段扩增的失败。

(5)PCR扩增的是位于两种引物之间的DNA片段，合理设计引物是PCR成功的关键。;【典例2】PCR实验中使用的微量离心管、缓冲溶液以及蒸馏水使用前必须进行的关键步骤是 ()。

A．反复洗涤 B．用酒精擦洗

C．高压灭菌 D．在－20℃储存

解析为了避免外源DNA等因素的污染，PCR实验中使用的微量离心管、枪头、缓冲液以及蒸馏水等在使用前必须进行高压灭菌。PCR所用的缓冲液和酶应分装成小份，并在－20℃储存。使用前，将所需的试剂从冰箱内拿出，放在冰块上缓慢融化。

答案C;【例1】(2011·广东理综，5)下列关于猪血红蛋白提纯的描述，不正确的是 ()。

A．洗涤红细胞时，使用生理盐水可防止红细胞破裂

B．猪成熟红细胞中缺少细胞器和细胞核，提纯时杂蛋白较少

C．血红蛋白的颜色可用于凝胶色谱法分离过程的监测

D．在凝胶色谱法分离过程中，血红蛋白比分子量较小的杂蛋白移动慢;解析猪成熟红细胞中缺少细胞器和细胞核，提纯时杂蛋白较少，是提纯血红蛋白的理想材料。提纯血红蛋白分四步：红细胞的洗涤、血红蛋白的释放、分离血红蛋白溶液、透析，其中洗涤红细胞时，要用生理盐水反复洗涤，既要将红细胞洗涤干净，又要不破坏红细胞，然后再用蒸馏水和甲苯使红细胞破裂，释放出血红蛋白。分离提纯血红蛋白时用凝胶色谱法，是根据相对分子质量的大小来分离蛋白质，相对分子质量大的蛋白质移动速度较快；血红蛋白的颜色可用于观察红色区带的移动情况，并据此判断分离效果。故D不正确。

答案D;【例2】(江苏高考)下列叙述中错误的是 ()。

A．改变NaCl溶液的浓度只能使DNA溶解而不能使其析出

B．在沸水浴中，DNA遇二苯胺试剂会呈现蓝色

C．用电泳法可分离带电性质、分子大小和形状不同的蛋白质

D．用透析法可去除蛋白质样品中的小分子物质

解析提取DNA的原理，是DNA在不同浓度NaCl溶液中的溶解度不同。DNA在质量浓度为0.14mol/L的NaCl溶液中溶解度最小，因此如果将NaCl浓度调至质量浓度为0.14mol/L会使DNA溶解度变小而呈析出状态。

答案A