多年生异担子菌检验技术规程 DB3211 T 1099-2024.pdfVIP

ICS62.020.20

CCSB62

3211

镇江市地方标准

DB3211/T1099—2024

多年生异担子菌检验技术规程

CodeofpracticeforexaminationofHeterobasidionannosum

2024-12-30发布2025-02-01实施

镇江市市场监督管理局  发布

DB3211/T1099—2024

多年生异担子菌检验技术规程

1范围

本标准确立了多年生异担子菌检验流程，规定了该病菌症状、采样、核酸制备、等温扩增反应、和

结果判定等各阶段操作要求。

本标准适用于进出境松、柏属植物材料中携带多年生异担子菌的检验。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，

仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本（包括所有的修改单）适用于本

文件。

SN/T2589植物病原真菌检测规范

3术语和定义

3.1多年生异担子菌（Heterobasidionannosum(Fr.)Bref.）属于担子菌门（Basidiomycota），伞

菌纲（Agaricomycetes），红菇目（Russulales），刺孢多孔菌科（Bondarzewiaceae），异担子

菌属（Heterobasidion）。

4检验流程

多年生异担子菌具体检验流程见图1。

图1检验流程图

1

DB3211/T1099—2024

5症状

该病菌主要寄生在植物的根部、茎干基部，尤其是边材。此病菌感染树木的形成层和外木质部，导

致典型的白色层状腐朽。多年生异担子菌的相关资料见附录A。

6仪器设备、试剂和培养基

6.1仪器设备

超净工作台、恒温培养箱、超低温冰箱、常规冰箱、高压灭菌锅、恒温水浴锅、小型离心机、显微

镜、PCR仪、电泳仪、水平电泳槽、凝胶成像系统、制冰机、电子天平、涡旋振荡器、微量进样器等。

6.2试剂

除另有规定外，所有试剂均为分析纯或生化试剂。

10×ThermoPolBuffer，MgS0，dNTPs，甜菜碱，BstDNApolymerase，羟基萘酚蓝。4

6.3培养基

马铃葡萄糖琼脂培养基（PDA）：将200g去皮马铃薯切成小块，沸水煮20min后过滤，弃去滤渣

在滤液中加入葡萄糖和琼脂粉各20g，加蒸留水定容至1L。配成溶液后121℃下灭菌20min。

7采样

样品的采集、分离、纯化和培养按照SN/T2589植物病原真菌检疫鉴定方法进行。样品采集后，放

入密封的容器内，送实验室。将取样结果进行记录，记录表格见附录B。样品应保存在-20℃下，避免

反复冻融。

8核酸制备和扩增反应

8.1核酸的制备

采用基因组提取试剂盒制备DNA，-20℃保存备用。将提取的多年生异担子菌的DNA用分光光度计测

-1

定浓度，其质量浓度大于100pg·μL符合LAMP检测的要求。

8.2引物序列

正向外部引物F3：GTCCTGCACGACCAACTG，

反向外部引物B3：GGAATGACCTTGCCGACG，

正向内部引物FIP：TAGCAGTGGTGGCGTGGATGGTCATCCACGACAAGTACGG，

反向内部引物BIP：GGA