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第40卷，第1期光谱学与光谱分析Vol.40,No.1,ppl31-135
0年#
2021月SpectroscopyandSpectralAnalysisJanuary2020
基于无标记荧光共振能量转移的microRNA检测方法研究
张文月X郝文会X赵静2,王愈聪1
1河北大学化学与环境科学学院药物化学与分子诊断省部共建教育部重点实验室河北保定
，，071002
2.河北大学综合实验中心河北保定
，071002
摘要利用以阳离子共轭聚合物为能量供体的荧光共振能量转移(FRET)策略和滚环扩增放大技术，建立
%
了一种新型的microRNA(miRNA)检测方法阳离子共轭聚合物采用聚［(9,9-双6+N,N,N-三乙基铵)己(
基)亚芴基亚苯基二溴化物］(PFPPFP是一种由大量吸光单元共轭而成的阳离子聚合物,具有独特的光捕
)
获和荧光增强性能，可以和带有负电荷的DNA通过静电作用相互结合％SG是一种能够结合于所有双链
,,
DNA双螺旋小沟区域的染料,其在游离状态下荧光微弱，但一旦与双链DNA结合后荧光会大大的增
强%首先,设计了一条可与目标分子特异性杂交的锁式探针和与RCA产物序列互补的DNA链%当体系中
miRNA,在DNA连接酶作用下,锁式探针连接成环；,DNA
存在时T4随后在phi29聚合酶和dNTPs共
同作用下,在miRNA的3,端滚环扩增出一条与锁式探针序列互补的长单链DNA所得产物与互补,DNA链
杂交形成双链DNA(dsDNA)%此时SG作为FRET受体掺入其中，形成SG-dsDNA共同体%随后，SG-dsD-
与
NAPFP因静电相互作用而紧密接近,由于PFP的发射光谱与SG的激发光谱有重叠,因此二者之间可
%
以发生FRET现象,miRNA时,,阻止了扩增反应的进行
反之当体系中不存在挂锁探针则无法连接成环
,
链的杂交反应%加入后由于SGDNASG
及其产物与互补DNA
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