一种高效易感PRRSV的BHK-21细胞系的构建方法.pptx

一种高效易感PRRSV的BHK-21细胞系的构建方法汇报人：XXX2025-X-X

目录1.引言

2.材料与试剂

3.细胞培养方法

4.病毒接种与培养

5.病毒感染鉴定

6.高效易感细胞系的筛选

7.结果与讨论

8.结论

01引言

PRRSV概述病毒简介猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）是一种单链RNA病毒，属于冠状病毒科。自1991年首次在美国发现以来，已在全球范围内广泛传播，对养猪业造成了巨大的经济损失。PRRSV主要感染猪，尤其是育肥猪和母猪，可导致猪只繁殖性能下降、生长迟缓和呼吸道症状等。病毒分类PRRSV根据基因序列和致病性可分为两个亚型：经典型PRRSV（VR-2332）和欧洲型PRRSV（VR-2332-like）。两者在基因序列上有约30%的差异，欧洲型PRRSV的致病性更强，对猪只的危害更大。病毒传播途径PRRSV主要通过呼吸道传播，也可通过垂直传播和接触传播。病毒在猪舍内可长期存活，并通过空气、粪便、尿液等途径传播。此外，带毒猪只、污染的器械和运输工具也是病毒传播的重要途径。了解病毒传播途径对于制定有效的防控措施至关重要。

BHK-细胞系在PRRSV研究中的应用细胞系特点BHK-21细胞系是一种原代小鼠肾细胞系，具有易于培养、生长速度快、繁殖能力强等特点。该细胞系广泛用于病毒学研究，特别是用于研究PRRSV的复制和致病机制。病毒复制研究BHK-21细胞系对PRRSV具有较高的易感性，能够有效支持病毒的复制。研究人员利用BHK-21细胞系成功建立了PRRSV的体外复制模型，为研究病毒的生命周期和复制机制提供了重要工具。疫苗研发应用BHK-21细胞系在PRRSV疫苗研发中也发挥着重要作用。该细胞系可用于生产PRRSV疫苗的原液，并通过细胞培养技术提高疫苗的产量和质量，为防控PRRSV提供了有力支持。

高效易感细胞系的构建意义提高研究效率构建高效易感细胞系可以显著提高PRRSV相关研究的效率。在传统的动物模型中，实验周期长，成本高，而细胞系可以缩短研究周期，降低实验成本，加快病毒学和疫苗学的研究进展。优化疫苗研发高效易感细胞系为疫苗研发提供了理想平台。通过细胞系可以筛选和评估候选疫苗的效果，优化疫苗配方，为开发更有效、更安全的PRRSV疫苗提供支持。促进疾病防控高效易感细胞系的构建对于预防和控制PRRSV具有重要意义。通过细胞系可以模拟病毒在宿主体内的复制过程，为疾病防控策略的制定提供科学依据，有助于降低PRRSV对养猪业的危害。

02材料与试剂

细胞培养材料细胞培养基细胞培养基是细胞培养的核心材料，通常包括基础培养基和添加剂。基础培养基提供细胞生长所需的基本营养，添加剂如血清、抗生素等则增强培养基的复杂性和生物活性。常用的细胞培养基有DMEM、MEM、RPMI-1640等。培养容器细胞培养容器需保持无菌状态，常用的有培养皿、培养瓶和流式细胞培养器等。容器材料通常为塑料或玻璃，其中塑料容器更轻便，玻璃容器透明度更高，便于观察细胞形态。二氧化碳培养箱细胞培养需要在二氧化碳培养箱中进行，以维持细胞培养环境的pH值稳定。培养箱通常设置有温度、湿度、二氧化碳浓度等调节功能，确保细胞在适宜的微环境中生长。

病毒材料病毒原液病毒原液是进行病毒培养和实验的基础材料，通常由感染病毒的细胞制备而成。原液需经过离心、过滤等步骤去除细胞碎片和杂质，确保病毒颗粒的纯度。病毒原液的病毒滴度通常以50%组织细胞感染剂量（TCID50）表示。病毒抗原病毒抗原是病毒感染细胞后产生的蛋白质，用于免疫学检测和疫苗研发。抗原的提取方法包括细胞裂解、免疫亲和层析等，提取的抗原需经过纯化处理，以保证其免疫原性。病毒核酸病毒核酸是病毒的遗传物质，可用于分子生物学研究，如病毒基因测序、基因编辑等。提取病毒核酸的方法包括有机溶剂法、磁珠法等，提取的核酸需进行定量和纯度检测，以确保实验结果的准确性。

实验试剂细胞毒性检测细胞毒性检测试剂用于评估实验试剂对细胞的毒性影响。常用试剂如MTT、CCK-8等，通过检测细胞活力来判断试剂是否安全用于细胞培养。例如，MTT试剂在细胞代谢旺盛时会将黄色晶体转化为蓝色产物。病毒分离纯化病毒分离纯化试剂包括离心管、过滤器、消毒剂等。离心管用于收集病毒颗粒，过滤器用于去除杂质，消毒剂如酒精、漂白剂等用于实验环境的清洁。纯化后的病毒滴度需达到一定标准，如10^6TCID50/ml。免疫学检测免疫学检测试剂包括抗体、酶联免疫吸附剂（ELISA）试剂盒等，用于检测病毒感染或免疫反应。抗体可以特异性识别病毒抗原，ELISA试剂盒则用于定量分析抗体水平。例如，ELISA试剂盒可以检测血清中的PRRSV抗体。

03细胞培养方法

BHK-细胞的传代培养传代准备传代前需准备无菌操作台、移液器、培养皿、消毒剂等。细胞需在新鲜培