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布鲁氏菌双抗夹心ELISA检测方法的建立与验证

目录

布鲁氏菌双抗夹心ELISA检测方法的建立与验证（1）．．．．．．．．．．．．．4

一、内容综述．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．4

1.1布鲁氏菌感染现状．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．5

1.2双抗夹心ELISA检测方法的重要性．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．6

1.3研究目的与意义．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．7

二、布鲁氏菌及双抗夹心ELISA检测方法概述．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．9

2.1布鲁氏菌简介．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．10

2.2双抗夹心ELISA检测原理．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．11

2.3双抗夹心ELISA检测优点．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．12

三、实验材料与检测方法建立．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．13

3.1实验材料．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．14

3.1.1菌株与血清．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．15

3.1.2试剂与仪器．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．17

3.2双抗夹心ELISA检测方法的建立．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．19

3.2.1抗原包被．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．19

3.2.2血清标本处理．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．20

3.2.3酶标抗体及显色反应．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．21

四、检测方法的验证与优化．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．22

4.1特异性验证．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．23

4.2敏感性验证．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．25

4.3重复性验证．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．27

4.4临床样本验证．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．27

4.5方法优化．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．29

五、结果分析．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．30

5.1数据分析方法．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．31

5.2验证结果．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．33

5.3优化后结果．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．34

六、讨论与结论．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．34

布鲁氏菌双抗夹心ELISA检测方法的建立与验证（2）．．．．．．．．．．．．35

内容综述．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．35

1.1研究背景与意义．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．36

1.2布鲁氏菌简介．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．38

1.3ELISA技术概述．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．39

1.4双抗夹心ELISA检测方法的提出．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．40

实验材料与仪器．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．41

2.1主要试剂与溶液．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．42

2.1.1布鲁氏菌抗原．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．43

2.1.2酶标