糖代谢相关检验.ppt

*******************基础胰岛素的分泌速率大约为1U/h，每日分泌总量约为40U。********低血糖时，在几分钟之内刺激葡萄糖的释放增加，随后生长激素和皮质醇释放，增加葡萄糖的动员并减少血糖的利用（3~4h）。其中胰高血糖素最为重要，当缺乏胰高血糖素时，主要是肾上腺素起作用，而其他一些激素的作用居次。****糖尿病的长期高血糖将导致多种组织器官的损害、功能紊乱和衰竭，尤其是眼、肾、神经与心血管系统。长期高血糖使患者易继发感染，青少年患者可出现生长发育迟缓，另外可并发危及生命的糖尿病酮症酸中毒和高渗性非酮症糖尿病性昏迷等。**在糖尿病中，绝大部分为2型糖尿病，约占90~95%，1型糖尿病约为5%~10%，其他型糖尿病仅占较小比例。*有机化学法：邻甲苯胺法原理：葡萄糖为一含醛基的已糖，在酸性条件下加热，可脱水生成5-羟甲基-2-呋喃甲醛，后者与邻甲苯胺缩合成青色的Schiff碱。Schiff碱颜色的深浅与样品中葡萄糖的含量成正比。评价：操作简便，特异性高，操作简便，可直接采用血浆或血清进行测定，但其使用的试剂具有腐蚀性和致癌性，现应用较少。第30页，共58页，星期日，2025年，2月5日酶法葡萄糖氧化酶(GOD)法己糖激酶(HK)法葡萄糖脱氢酶法国际公认国家推荐第31页，共58页，星期日，2025年，2月5日实验9-1

葡萄糖氧化酶（glucoseoxidase,GOD）法测定血糖原理：葡萄糖氧化酶利用氧和水将葡萄糖氧化为葡萄糖酸，并释放过氧化氢。过氧化氢在过氧化物酶(peroxidase，POD)作用下，分解为水和氧的同时将无色的4-氨基安替比林与酚氧化缩合生成红色的醌类化合物。红色的深浅在一定范围内与葡萄糖浓度成正比，在510nm波长处测定吸光度，与标准管比较可计算出血糖的浓度。第32页，共58页，星期日，2025年，2月5日试剂准备磷酸盐缓冲液（0.1mol/L,pH7.0）酶试剂 葡萄糖氧化酶1200U，过氧化物酶1200U，4-氨基安替比林 10mg，溶于上述磷酸盐缓冲液80mL中，调pH7.0，定容 至100mL，2-8℃保存，可保存3个月酚溶液 重蒸馏酚100mg溶于100mL蒸馏水中，避光、2-8℃保存 ，可保存1个月苯甲酸溶液（12mol/L）葡萄糖标准液（5.0mmol/L）第33页，共58页，星期日，2025年，2月5日实验操作加入物/mL空白管标准管测定管血清－－0.02葡萄糖标准液－0.02－蒸馏水0.02－－酶酚混合试剂3.03.03.0混匀，置37℃水浴保温15分钟，每管加蒸馏水0.5ml，在510nm波长处比色，以空白管调零，读取各管吸光度。根据各管吸光度计算其血糖浓度。结果计算取3支试管，按下表操作葡萄糖含量（mmol/L）葡萄糖标准液浓度A标准管A测定管=×第34页，共58页，星期日，2025年，2月5日自动化分析仪检测试剂 主要成分与手动检测类似，见试剂盒说明书。 工作液配置：根据标本量，临时将酶试剂与缓冲液按 照1:4比例混匀。操作 定标、质量控制、标本上机结果计算 1mg/dLX0.0555=0.0555mmol/L第35页，共58页，星期日，2025年，2月5日葡萄糖氧化酶法可直接测定脑脊液的葡萄糖含量，但不能直接测定尿液葡萄糖含量。这是因为尿液中的尿酸等干扰物质浓度过高，可干扰过氧化物酶反应，造成结果假性偏低。对于血液样品需及时分离红细胞。因为红细胞的酵解将会导致测定结果偏低。建议测定样品以草酸钾-氟化钠为抗凝剂以抑制糖酵解。注意事项第36页，共58页，星期日，2025年，2月5日严重黄疸、溶血及乳糜样血清先制备无蛋白血滤液，然后在进行测定。酶酚混合液一般现用现配。葡萄糖氧化酶对β-D葡萄糖高度特异，溶液中的葡萄糖约36%为α型，64%为β型。葡萄糖的完全氧化需要α型到β型的变旋反应。葡萄糖变旋酶，可加速这一反应，延长孵育时间可达到完成自发变旋过程。新配制的葡萄糖标准液主要是α型，故须放置2h以上(最好过夜)，待变旋平衡后方可应用。注意事项第37页，共58页，星期日，2025年，2月5日计算：葡萄糖标准液：5mmol/L血清葡萄糖（mmol/L）=AT/AS×CS参考值：3.9~6.1mmol/L第38页，共58页，星期日，2025年，2月5日本法测定葡萄糖非常特异，从原理反应式中可知第一步是