茅版第三章转录—RNA生物合成.ppt

*不依賴?因數的終止序列回文序列中富含GC堿基，回文序列下游常有6~8個AT堿基對(左圖)；依賴?因數的終止序列回文序列GC含量較少，回文序列下游序列無固定特徵，AT堿基對含量比前一種終止子低(右圖)。兩類終止序列的比較*3、抗終止與抗終止因數1）抗終止anti-termination在抗終止因數作用下，RNA聚合酶無視轉錄終止信號而繼續轉錄，從而產生較長的mRNA轉錄物。*Newsigmafactors?Differentpromoters????Antitermination??Samepromoter*2）抗終止作用機理——以?噬菌體基因轉錄為例四個主要操縱子阻遏蛋白操縱子，啟動子PM；左向早期操縱子，啟動子PL；右向早期操縱子，啟動子PR；右向晚期操縱子，啟動子為PR’*?噬菌體抗終止作用的分子基礎?噬菌體有兩個轉錄抗終止因數：pN和pQ；抗終止信號是位於終止子上游的一段DNA序列，pN有兩個抗終止信號，一個是緊接PL的nutL，另一個是緊靠tR1的nutR，兩個信號序列的只相差一個堿基對；pQ的抗終止信號為qut，緊鄰PR’。*抗終止因數作用的機理pN和pQ都是通過與RNA聚合酶結合而修飾其構象，從而穿越終止子。pN與聚合酶核心酶作用，即核心酶遇到nut位點時，輔助因數NusB-S10、NusG、NusA和pN先後加入改變構象；pQ在轉錄起始階段與聚合酶全酶作用。*Nut序列特徵與抗終止輔助因數Nut位點由兩部分序列組成boxA和boxB；核心酶穿越boxA區域時，NusB-S10結合上來，隨後在boxB區域與NusA和pN蛋白結合；在抗終止因數pN的作用下，RNA聚合酶通讀終止子，得到由即早期序列與晚早期序列聯合的mRNA序列。*1、轉錄複合體裝配轉錄因數UBF1與UCE和CORE元件結合SL1與UBF1結合形成複合體；RNAPI在核心啟動子（CORE）與SL1中的TBP結合，起始轉錄。1）RNA聚合酶I轉錄複合體（二）真核生物基因轉錄*RNA聚合酶I轉錄複合體組分*2）RNA聚合酶II轉錄複合體裝配裝配過程TFIID識別並結合TATA框；TFIIA結合並穩定TFIID與DNA形成的複合體；RNA聚合酶II全酶裝配形成起始前複合物PIC。裝配順序TFIID→TFIIA→TFIIB→(TFIIF+RNAP?II)→TFIIE→TFIIH*轉錄延伸封閉複合體PIC水解ATP，提供能量使DNA熔解轉變為開放複合體；以NTPs為前體起始mRNA的合成；RNAPII最大亞基CTD（C-terminaldomain）磷酸化；磷酸化使TFIIB、TFIIE和TFIIH脫離轉錄複合體，即啟動子清除;延伸複合體合成mRNA。*3）RNA聚合酶III轉錄複合體裝配TFIIIA與啟動子位點結合；TFIIIC覆蓋全基因，形成穩定的複合體；TFIIIB結合於轉錄起始位點周圍；RNApolymeraseIII結合並起始轉錄。*5SrRNA基因轉錄*第三節RNA加工*RNA加工（RNAprocessing）

新合成的RNA分子在結構和化學等方面的修飾成熟過程。RNA加工或是對RNA的功能極其重要或是代表了一類基因調控的機制。RNA加工可發生在轉錄過程中（共轉錄修飾），也可在轉錄後（轉錄後修飾）。pre-RNA：前體RNA；hnRNA：核內不均一RNA/異質核RNA。*一、mRNA末端修飾與甲基化1、5’端加帽真核生物mRNA轉錄從嘌呤核苷三磷酸開始；在鳥苷醯轉移酶作用下起始核苷酸與鳥嘌呤核苷三磷酸以5’-5’三磷酸鍵二酯鍵相連；通過RNA鳥嘌呤-7-甲基轉移酶在G7位甲基化，產生帽子0；原始轉錄本第1、2堿基O2’甲基化則分別構成帽子1和帽子2。*2、3’端多聚腺苷酸化轉錄產物近3‘端有保守序列AAUAAA，即多腺苷酸化位點；特異性內切酶識別該位點，在位點下游10-30堿基處切除；由RNA末端腺苷酸轉移酶催化，以ATP為前體聚合腺苷酸。*1、rRNA前體的剪切與成熟二、非翻譯RNA的加工1）剪切原核生物剪切酶——RNaseIII/RNaseE/RNaseP；輔助因數——核糖體蛋白S4。真核生物剪切酶——類似於原核生物RNaseIII。2）修飾原核生物核糖2‘-位置的甲基化；真核生物多位點甲基化。*大腸桿菌rrnX轉錄單元的加工過程轉錄產物為30SRNA前體；RNaseIII切割生