荧光显微镜的基本原理.ppt

关于荧光显微镜的基本原理第1页，共14页，星期日，2025年，2月5日光学显微镜的基本参数主要技术参数数值孔径NA第2页，共14页，星期日，2025年，2月5日第3页，共14页，星期日，2025年，2月5日荧光显微镜(fluorescencemicroscope)：某些物质经一定波长的光（如紫外光）照射后，物质中的分子被激活，吸收能量后跃迁至激发态；当其从激发态返回到基态时，所吸收的能量除部分转化为热量或用于光化学反应外，其余较大部分则以光能形式辐射出来，由于能量没能全以光的形式辐射出来，故所辐射出的光的波长比激发光的要长，这种波长长于激发光的可见光部就是荧光(fluorescence)。所谓荧光就是某些物质在一定波长光（如紫外光）的照射下、在极短时间内所发出的比照射光波长更长的可见光。第4页，共14页，星期日，2025年，2月5日第5页，共14页，星期日，2025年，2月5日第6页，共14页，星期日，2025年，2月5日Figure9-14MolecularBiologyoftheCell(?GarlandScience2008)Themaximumexcitationandemissionwavelengthsofseveralcommonlyusedfluorescentprobesareshowninrelationtothecorrespondingcolorsofthespectrum.第7页，共14页，星期日，2025年，2月5日第8页，共14页，星期日，2025年，2月5日荧光显微镜的组成1、光源：一般采用高压汞灯2、滤色系统：由激发滤板和压制滤板组成a、激发滤板：提供一定范围的激发光b、压制滤板：完全阻挡激发光通过，提供相应滤长范围的荧光3、反光镜：一般采用平面反光镜4、聚光镜：用石英玻璃或其他透紫外光的玻璃制成5、物镜和目镜第9页，共14页，星期日，2025年，2月5日Theopticalsystemofafluorescencemicroscope.Afiltersetconsistsoftwobarrierfilters(1and3)andadichroicmirror(beam-splitting2)第10页，共14页，星期日，2025年，2月5日