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MM_FS_CNG_0512食品添加剂维生素D2（麦角钙化醇）

MM_FS_CNG_0512

食品添加剂维生素D2（麦角钙化醇）

1.适用范围

本方法适用于以麦角甾醇为原料制成的维生素D2，在食品工业中作为营养强化剂。

2.产品化学名称、分子式、结构式、分子量

化学名称：9，10开环麦角甾5，7，10（19），22四烯3β醇

9，10secoergosta5，7，10（19），22tetraen3βol

分子式：C28H44O

结构式：

分子量：396.66（按1987年国际原子量）

本品为无色针状晶或白色结晶性粉末，无臭无味，遇光或空气均易变质。本品在三氯甲烷中极易溶解，在乙醇、丙酮或乙醚中易溶，在植物油中略溶，在水中不溶。

项目

指标

含量（以C28H44O计），％

麦角甾醇（洋地黄皂甙试验）

不发生浑浊或沉淀

比旋度〔α〕2D0

°°

吸收系数（265nm）E11％cm

460～490

三氯甲烷；

乙酸酐；

硫酸。

取本品约0.5mg，加三氯甲烷5mL溶解后，加乙酸酐0.3mL与硫酸0.1mL振摇，初显黄色，后渐变红色迅速变为紫色，最后成绿色。

色谱纯试剂：正戊醇、正己烷、异辛烷；

2，6二叔丁基对甲酚；

内标试剂：邻苯二甲酸二甲酯；

标准品：维生素D标准品，由卫生部颁发。

高压液相色谱仪。

称取维生素D2对照品25mg（准确至0.0002mg），置于100mL棕色量瓶中，加异辛烷80mL，避免加热，用超声处理助溶1min使完全溶解，加异辛烷至刻度，摇匀，充氮密塞，避光，0℃以下保存。

精密取邻苯二甲酸二甲酯25mg，置25mL棕色量瓶中，加正己烷至刻度，摇匀。

精密取供试品25mg，置100mL的棕色量瓶中，加异辛烷80mL，避免加热，超声处理助溶1min使完全溶解，加异辛烷至刻度，摇匀。精密量取上述溶液与内标液各5mL，置50mL棕色量瓶中，加正己烷至刻度，摇匀，作为供试品溶液。

用硅胶为填充剂，正己烷正戊醇（994∶6）为流动相，检测波长为254nm，量取维生素D2对照品贮备液5mL，置具塞玻璃容器中，通氮后密塞，置90℃水浴中加热1h，取出迅速冷却后，加正己烷5mL，摇匀，置1cm具塞石英吸收池中，将石英吸收池斜放成45°，在主波长为254nm和365nm的紫外线照射5min，使溶液中含有前维生素D2、反式维生素D2、维生素D2和速甾醇D2，取此溶液注入液相色谱仪中，测定维生素D2峰值，先后进样5次，相对标准偏差应不大于2.0％，前维生素D2（与维生素D2的比保留时间约0.5）与反式维生素D2（与维生素D2的比保留时间约为0.6）以及维生素D2与速甾醇D2（与维生素D2的比保留时间约为1.1）的峰分离度均大于1.0。

精密取对照品储备溶液和内标溶液各5mL，置50mL棕色量瓶中，加正己烷至刻度，摇匀；取一定量注入液相色谱仪，计算维生素D校正因子f1。精密取对照品贮备液5mL，置50mL棕色量瓶中，加入2，6二叔丁基对甲酚结晶1粒，通氮排气后，密塞，置90℃水浴中加热1.5h，取出迅速冷却至室温，精密加内标溶液5mL，加正己烷至刻度，摇匀，取一定量注入色谱仪，计算校正因子。

f2＝（Asmr－f1·ms·Ar1）／（Ar2·ms）…………（1）

式中：f2——前维生素D2折算成维生素D2的校正因子；

As——内标的峰面积；

mr——加入对照品的量，g；

f1——维生素D2的校正因子；

ms——加入内标物质的量，g；

Ar1——维生素D2的峰面积；

Ar2——前维生素D2的峰面积。

按高效液相色谱法中内标加校正因子测定法（《中华人民共和国药典》一九九○年版二部附录第68页）测定，取样品溶液，注入液相色谱仪中，记录色谱图，测量峰面积。

x＝（f1·Ai1＋f2·Ai2）ms×100／（As·m）.………（2）

式中：x——维生素D2及前维生素D2折算成维生素D2的总含量，％；

Ai1——维生素D2的峰面积；

Ai2——前维生素D2的峰面积；

ms——加入内标物质的量，g；

As——内标的峰面积；

M——样品质量，g。

本方法平行测定的允许绝对差在1.5％以内。

乙醇：90％（V／V）乙醇；

洋地黄皂甙溶液：取洋地黄皂甙（生化试剂）20mg，加90％乙醇2mL，加热溶解制成。

取本品10mg，加90％乙醇2mL溶解后，加洋地黄皂甙溶液2mL混合，放置18h，不得发生浑浊或沉淀。

无水乙醇。

旋光仪。

取本品，精密称定，加无水乙醇制成每1mL中约含40μg的溶液，按照《中华人民共和国药典》一九九○年版二部附录第17页旋光度测定法测定（应于容器开启30m