微生物的分离和纯培养.pptVIP

（二）、纯种平板分离的不同方法从土壤中分离纯微生物104/ml103/ml102/ml101/ml涂布平板法稀释倒平板法涂布平板法（spreadplatemethod)稀释倒平板法（倾注平板法）（pourplatemethod)第一区划线灭菌接种环第二区划线灭菌接种环第三区划线灭菌接种环平板划线法（streakplatemethod）分区划线法（蛇形线法）操作图分区划线法适用范围：适用于浓度较大的样品连续划线法操作图连续划线法适用范围：适用于浓度较小的样品培养严格厌氧微生物稀释摇管法（dilutionshakeculturemethod)01个别细胞较大的细菌原生动物、藻类02接种物液体培养基顺序稀释法分离03营养琼脂平板不能长菌落04如何分离纯培养？二、用液体培养基分离纯化培养培养物在液体培养基中进行高度顺序稀释，如果经稀释后的同一稀释度的大多数（95%以上）试管中没有微生物生长，有微生物生长的试管得到的培养物可能就是纯培养物。微生物分离纯化方法用固体培养基分离、纯培养稀释倒平板法涂布平板法平板划线法稀释摇管法用液体培养基分离、纯培养上节课知识回顾三、单细胞（单孢子）分离采用显微分离法从混杂群体中直接分离单个细胞或单个个体进行培养以得到纯培养，称为单细胞（单孢子）分离法。较大的微生物可使用毛细管提取个体较小的微生物需采用显微操作仪分离难度与细胞或个体的大小成反比营养琼脂平板上不能形成菌落Eachcolonywasexaminedmicroscopically01创造适于目的微生物生长条件03促使目的微生物快速生长呈优势菌05从混杂微生物中分离目的微生物02原理04抑制非目的微生物生长四、选择培养分离利用选择培养基进行直接分离选择培养基只允许特定微生物生长，而同时抑制或阻止其他微生物生长的培养基1、利用选择培养基进行直接分离土壤目的菌优势非目的菌选择培养基直接分离单细胞选择培养基平板（含牛奶或酪蛋白唯一C、N源）37℃培养目的菌落菌落周围有透明蛋白水解圈例一：分离筛选蛋白酶产生细菌含牛奶选择培养基目的菌生长平板01营养选择因子：牛奶或酪蛋白02只允许分解利用蛋白质的目的菌生长，淘汰非目的菌长出的目的菌并不一定是同种细菌，但皆产蛋白酶03例一：分离筛选蛋白酶产生细菌04例二：分离筛选产高温淀粉酶（65℃）细菌单细胞65℃培养淀粉水解透明圈目的菌菌落选择培养基平板（淀粉为唯一C源）选择因子：营养选择因子淀粉环境选择因子65℃高温人为创造一些条件只让所需的微生物生长，在这些条件下，所需要的微生物能有效地与其他微生物进行竞争，在生长能力方面远远超过其他微生物。富集培养法富集培养是分离微生物菌种最强有力的技术之一营养选择因子和生理条件选择因子可无穷尽组合，可从自然界选择分离各类特异微生物例：从土壤中分离能产生?－半乳糖苷酶的微生物01富集培养02选择培养基分离03目的菌验证04如果培养物中只含有两种微生物，而且是有意识的保持两者之间的特定关系的培养物称为二元培养物。病毒和宿主细胞纤毛虫、变形虫和粘细菌五、二元培养物微生物纯培养分离方法的比较方法应用范围稀释倒平板法

涂布平板法平板划线法稀释摇管法液体稀释法单细胞分离法选择培养分离即可定义,又可定量,用途广泛用得最多方法简便,多用于分离细菌主要分离严格厌氧菌适用于培养细胞较大的微生物局限于高等专业化的科学研究适用于分离某些生理类型较特殊的微生物01用于分离、培养微生物的器具事先不含任何微生物02在转接、培养微生物时防止其他微生物的污染在分离、转接及培养纯培养物时防止其被其他微生物污染的技术称为无菌技术。它是微生物研究进行的关键。六、无菌技术1、所用物品的灭菌技术A、玻璃或金属器皿灭菌01高温干热灭菌：干燥箱160－170℃干热空气2h灭菌湿热灭菌：高压蒸汽灭菌锅121℃湿热灭菌30min01B、培养基或溶液的灭菌湿热灭菌：高压蒸汽灭菌锅121℃湿热灭菌30minC、血清或生长因子溶液灭菌过滤除菌：细菌滤器滤膜孔径小于细菌细胞的大小12上节课知识回顾二、无菌技术单孢子分离选择培养分离二元培养物一、微生物分离纯化方法1、所用物品的灭菌技术玻璃或金属器皿灭菌培养基或溶液灭菌血清或生长因子灭菌接种:将微生物接到适于它生长繁殖的人工培养基上或活的生物体内的过程叫做接种.01无菌接种:培养基经高压灭菌后，用经过灭菌的工具在无菌条件下将含菌材料接种于培养基