A095 ATP含量测定试剂盒说明书.pdf

ATP含量测定试剂盒简化说明书

一、所需仪器

可见分光光度计、恒温水浴锅、漩涡混匀器

样本前处理：

○红细胞：抗凝全血取下层压积红细胞，一般按1：4的体积比加双蒸水进行稀释，再混匀

使溶血完全，制备成溶血液。将制好的溶血液加入玻璃试管中沸水加热煮10分

钟，流水冷却后，4000转离心10分钟，取出混匀抽提1分钟，取上清液待测。

○组织样本：称重后，剪碎，按重量体积比（W/V）1：9加入沸双蒸水，在沸水中匀浆，制

成10%的匀浆液，再置于沸水浴中煮10分钟，取出混匀抽提1分钟，4000转/

分离心10分钟，取上清液待测。

○培养细胞：先离心处理将细胞核培养上清分离，除去培养上清，得到下层沉淀细胞（一般

6

细胞数量达到10），将收集好的细胞加入300-500μl热双蒸水，置于热水浴

（90-100℃）中匀浆破碎，后将细胞悬液于沸水浴中加热10分钟，取出混匀

抽提1分钟，即可用于测定。

注：混匀抽提1分钟即为漩涡混匀1分钟。

二、操作步骤：

管别（ul）

标准管S标准空白管S测定管U对照管U

反应体系BB

蒸馏水1010

50μmol/LATP标准液3030

样本3030

试剂一：底物液Ⅰ100100100100

试剂二：底物液Ⅱ50505050

试剂三：促进剂3030

旋涡混匀，37°C水浴30分钟

试剂四：蛋白沉淀剂50505050

充分混匀后，4000rmp/min离心5分钟，取上清液210ul进行测定

试剂五：显色液500500500500

混匀，室温静置2分钟

试剂六：终止剂500500500500

室温静置5分钟，在636nm处0.5cm光径，蒸馏水调零，测各管吸光度值。

注：在比色前比色皿用自来水洗10余次，再用蒸馏水洗4～5次，以免磷污染。

五、计算公式及举例：

①红细胞中ATP含量计算公式：

ATP浓度测定管−对照管

=×标准浓度×样本测定前稀释倍数÷血红蛋白含量（Hbg/L)

(/)标准管−标准空白管

mmolgHb

UU

−

=B×0.05×mmol/L×样本测定前稀释倍数÷血红蛋白含量（Hbg/L)

SS

−

B

②组织中ATP