食品中转基因成分的检测.ppt

其他检测方法1蛋白质组学技术分析通过研究外源基因在同种或不同种作物中的蛋白质差异性表达检测转基因产品目前主要采用双向电泳-质谱技术及基于同位素标记的质谱分析技术进行蛋白质组学分析优点：不仅能够鉴定差异表达的蛋白，还能对其进行较为准确的定量第30页，共42页，星期日，2025年，2月5日第1页，共42页，星期日，2025年，2月5日第一节概述转基因生物：利用基因工程技术改变基因组的构成，用于农业生产或者农产品加工动植物、微生物及产品。主要是转基因植物。转基因食品：①：转基因动植物、微生物产品，如转基因大豆②：转基因动植物、微生物产品直接加工品，如转基因大豆油③：以①和②为原料生产的食品和添加剂，如转基因大豆油加工成的人造奶油。转基因成分（外源基因成分）：物种本身不具有的，而是来源于其他物种的功能基因序列。第2页，共42页，星期日，2025年，2月5日转基因食品的特征具有其原有基因表达的性状和功能存在外源DNA的表达产物及其生物活性第3页，共42页，星期日，2025年，2月5日基因重组体载体：自我复制，运载工具目的基因：转基因生物性状改变直接相关DNA调控元件：使目的基因表达精确开始和终止，表达增强标记基因：进行标记以便筛选转化细胞报告基因：编码某种易于检测蛋白质或酶的基因基因组基因组启动子终止子外源目的基因基因重组体示意图第4页，共42页，星期日，2025年，2月5日外源基因表达的产物主要包括：目的基因、标记基因和报告基因表达的蛋白，或意外表达的蛋白。使得其具有有传统食物有不同的生物特性，由此产生安全性问题。第5页，共42页，星期日，2025年，2月5日第二节食品中转基因成分检验检测方法概述主要针对外源DNA及其表达产物DNA分析蛋白质抗原特性PCR法ELISA和蛋白印迹法第6页，共42页，星期日，2025年，2月5日检测流程采样混样样品制备目标物质提取PCR或蛋白质检测结果判断结果报告第7页，共42页，星期日，2025年，2月5日采样要求1一般规定：所用器具清洁干燥无DNA和蛋白质污染；避免样品散落，防止污染生态环境；短时间内完成，避免样品组成发生变化2抽样方法：随机原则；“三层五点”；若加工工程损坏DNA,则加大采样量第8页，共42页，星期日，2025年，2月5日采样要求3抽样数量：根据转基因限量水平确定每批中应抽取的原始样品最小数量4样品制备与保存：分三份，用于检测，复检和备查；及时加贴标签，注明编号、货物名称、品种、抽样时间、抽样人及其他必要信息第9页，共42页，星期日，2025年，2月5日外源基因检测根据检测目的和检测结果特异性水平不同，检测方法可分为四类：初筛试验：普遍存在的基因重组通用元件基因特异性试验：基因重组体中含有的外源基因组成结构特异性试验：目的基因与调控基因连接处的核苷酸序列事件特异性试验：插入的基因序列和植物基因组之间的连接区第10页，共42页，星期日，2025年，2月5日DNA提取及纯化为什么要提取纯化？植物细胞中DNA主要存在于细胞核和细胞质中，细胞中各种DNA称为总DNA，其中95%以上的DNA是与蛋白质结合存在的。植物细胞中还存在大量多糖、蛋白质、多糖、多酚类物质和RNA等成分。这些物质都会影响后续DNA的PCR检测。第11页，共42页，星期日，2025年，2月5日DNA提取及纯化转基因成分检测时需要先提取总DNA，利用去污剂或有机溶剂破坏细胞膜，裂解细胞，是DNA与蛋白质分离并游离于提取液中，然后去除杂质成分。DNA纯化的原理是根据乙醇或异丙醇竞争结合水分子的能力远强于DNA，在DNA提取液中加入乙醇或异丙醇，DNA因溶解度降低而析出。第12页，共42页，星期日，2025年，2月5日DNA提取方法一类：改进的传统方法，如苯酚-氯仿法、溴化十六烷基三甲基胺法（简称CTAB法）、二氧化硅法等。第二类：试剂盒法，试剂盒法因为操作简便而被广泛应用。第13页，共42页，星期日，2025年，2月5日CTAB法样本准备：固体样本要研磨成大小在2mm以下的颗粒，也可以用液氮研磨至DNA充分释放并满足DNA提取的要求；液态样本可以通过离心沉淀、加热蒸发、冷冻干燥等方法得到干物质用于DNA提取。第14页，共42页，星期日，2025年，2月5日CTAB法原理CTAB能溶解细胞膜并能与DNA结合成CTAB-DNA复合物，该复合物可溶解于高盐溶液中（如氯化钠），蛋白质、多糖等物质在此溶解中因溶解度降低而生成沉淀，经离心后与复合物分离；然后将该复合物置于低盐溶液中，因其不溶性而沉淀析