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B40

唐

DB130

山市地方标准

DB1302/T327—2012

克仑特罗等3种β-受体激动剂检测技术规范

2012-03-01发布2012-04-01实施

唐山市质量技术监督局发布

DB1302/T327—2012

前言

本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。

本标准由唐山市质量技术监督局提出。

本标准起草单位：唐山市畜牧水产品质量监测中心。

本标准起草人：郑百芹、李爱军、张建民、葛怀礼、董李学、蒙君丽、苗建民、肖琎、张晓利、赵纳新。

DB1302/T327—2012

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克仑特罗等3种β-受体激动剂检测技术规范

1范围

本标准规定了猪、牛、羊的尿液和组织（肌肉/肝脏）中克仑特罗、沙丁胺醇、莱克多巴胺3种β-受体激动剂残留检验的胶体金免疫层析测定方法、酶联免疫吸附测定方法和液相色谱-串联质谱测定方法。

本标准适用于猪、牛、羊的尿液和组织（肌肉/肝脏）中克仑特罗、沙丁胺醇、莱克多巴胺单个或混合物残留量的快速集成检测。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本（包括所有的修改单或修订版）适用于本文件。

GB/T6682-2008分析实验室用水规则和试验方法

NY/T763-2004猪肉、猪肝、猪尿抽样方法

农业部1063号公告-3-2008动物尿液中11种β-受体激动剂的检测液相色谱-串联质谱法

农业部1025号公告-18-2008动物源性食品中β-受体激动剂残留检测液相色谱-串联质谱法

3总体要求

基层动物卫生监督部门和养殖企业采用胶体金快速检测试纸条进行现场快速检测；县（市、区）级检测中心采用酶联免疫试剂盒进行检测；市级畜牧水产品质量监测中心采用液相色谱-串联质谱法进行确证检测。

4抽样方法

猪尿液和组织（肌肉/肝脏）抽样方法按照NY/T763-2004执行；牛、羊的尿液和组织（肌肉/肝脏）抽样方法参照NY/T763-2004执行。

5胶体金免疫层析法

5.1适用范围

本方法适用于猪、牛、羊的尿液和组织（肌肉/肝脏）中克仑特罗、沙丁胺醇、莱克多巴胺的现场快速检测。

5.2方法原理

胶体金快速检测试纸条应用了竞争抑制免疫层析的原理，样品中的克仑特罗（沙丁胺醇/莱克多巴胺）在流动的过程中与胶体金标记的特异性单克隆抗体结合，抑制了抗体和NC膜检测限上的克仑特罗（沙丁胺醇/莱克多巴胺）—BSA偶联物的结合。

5.3试剂和材料

克仑特罗快速检测试纸条/沙丁胺醇快速检测试纸条/莱克多巴胺快速检测试纸条、一次性吸管、一次性塑料手套。

5.4样品前处理

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5.4.1尿液前处理方法

检测前将尿样回温到室温，如尿样浑浊，需3000r/min离心5min后检测或者静置30min。

5.4.2组织(肌肉/肝脏)前处理方法

取组织(肌肉/肝脏)样品于均质器中均质1min;称取1.0g(±0.02g)均质物于10mL离心管中，然后加入1mL样品提取液，涡旋1min;放入80℃~100℃水浴中15min,取出冷却到室温，待检。

5.5操作方法

取出检测试纸条，用吸管吸取待检样品溶液垂直滴加2~3滴(约80μL)于加样孔，液体流动时开始计时，反应5min～8min,根据图1判定结果。

阴性阳性无效

图1结果的判定

5.6环境控制

胶体金快速检测试纸条进行现场快速检测时，环境温度应控制在10℃~30℃。

5.7结果判定

阴性(-):T线和C线都显色，表示样品中克仑特罗(沙丁胺醇/莱克多巴胺)浓度低于检测限。

阳性(+):T线无显色，C线显色，表示样品中克仑特罗(沙丁胺醇/莱克多巴胺)浓度高于检测限。

无效：未出现C线，表明不正确的操作过程或试纸条已变质失效。在此情况下，用新的试纸条重新测试。

注：C线为质控限，T线为检测限。

6酶联免疫吸附测定法

6.1克仑特罗酶联免疫吸附法

6.1.1适用范围

本方法适用于猪、牛、羊尿液和组织(肌肉/肝脏)中克仑特罗残留量的快速筛选检测。

6.1.2方法原理

本方法采用直接竞争ELISA法检测样品中的克仑特罗。在微孔板上预包被抗克仑特罗单克隆抗体，样品或标准溶液中的克仑特罗和HRP标记的克仑特