物理图绘制课件.pptx

第3章;物理作图：

以DNA分子的序列排列为基础的非遗传学的作图技术统称为物理作图。

物理作图的方法和策略有多种多样，常用的有：

限制性作图；

基于克隆的基因组作图；

荧光原位杂交；

序列标签位点作图。;3.1限制性作图

3.2基于克隆的基因组作图

3.2.1大分子DNA的克隆载体

细菌人工染色体(bacterialartificialchromosome,BAC)：BAC载体源于大肠杆菌中天然的F质粒。F质粒有较大的克隆容量，可达300kb以上可采取类似制备质粒的方法直接提取克隆的DNA。;3.2.2重叠群组建;3.2.3指纹作图;;限制性带型(restrictionpatterns)指纹：

用不同限制性酶处理样品，经凝胶分离产生DNA条带。如果2个克隆产生的DNA条带有部分是相同的，说明它们含有重叠的序列。

;;STS作图(STScontentmaping)指纹：

当需将某一克隆重叠群锚定到现有的已具有STS标记的物理图上时，这一方法特别有效。因为STS是单一序列，并且序列已知。

根据选定的某个STS序列设计专一性引物，可对大量的单个克隆进行PCR检测，凡是能扩增出条带的克隆均含有序列重叠的插入子。;3.4辐射杂种作图;3.4.1序列标签位点;3.4.2辐射杂种作图的程序与方法;原理：经强辐射处理的人体细胞很快死亡，但若在辐射后立即处理过的细胞与未辐射的仓鼠或其他鼠类细胞融合，有些人体细胞染色体片段将会整合到鼠类染色体中进行扩增，因此又称为辐射与融合基因转移。

通常选择到的每个阳性杂种细胞系可保留5～10Mb大小的人细胞染色体片段，总约占人类基因组的15%～35%。这些杂种细胞的集合体称为辐射杂种群(radiationhybridpanel)，可作为一种作图试剂用于STS定位。

每次从杂种细胞分离DNA，用PCR检测杂种细胞中含有的STS标记，根据成对STS出现的频率，可判断这些标记是否连锁以及连锁程度。;3.5.1人类基因组整合图