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第2节动物细胞工程第二章细胞工程动物细胞培养本节聚焦1.动物细胞培养需要哪些基本条件?2.动物细胞培养的基本操作过程是什么?3.怎样客观分析干细胞在临床上的应用所产生的效益与风险?
从社会中来3月13日清晨,江苏南京一小区居民家中突发火灾,由于现场火势较大,屋内两人无法逃脱,丈夫把妻子放在阳台护栏外侧,紧紧拉着妻子不放手,自己却烧伤,随后,消防员赶到,将屋内两人救出。大面积烧伤的病人,需要移植健康皮肤1)使用他人皮肤?患者自身的不够用,如何解决?2)自身健康皮肤?非常有限免疫排斥反应小面积烧伤:患者通过切除+植皮(自身)后恢复。思考:怎样获得大量的自体健康皮肤?能不能用自体皮肤的单个细胞培养出可供移植的皮肤?
从社会中来动物细胞培养动物细胞核移植动物细胞融合动物细胞工程是最基础的技术单克隆抗体人造肉人造皮肤
动物细胞培养1.概念:从动物体中取出相关的组织,将它分散成单个细胞,然后在适宜的培养条件下,让这些细胞生长和增殖的技术。在适宜的培养条件下如何分散2.原理:3.地位:动物细胞工程的基础细胞分裂(增殖)4.培养对象:胚胎或幼龄动物的细胞幼龄个体的细胞分化程度低、分裂能力强,易培养。5.目的:获得细胞或者细胞产物不能获得完整动物个体未体现动物细胞的全能性
一、动物细胞培养的条件﹤动物细胞培养所需基本条件﹤营养条件其他条件糖类氨基酸无机盐维生素等适宜温度、pH和渗透压无菌、无毒的环境适宜的气体环境一般来说,动物细胞培养(模拟体内细胞正常生长增殖的环境)需要满足以下条件:*这里的糖类不包括淀粉、蔗糖等。动物细胞无法吸收二糖、多糖将细胞所需的营养物质按种类和所需量严格配制而成的培养基。含人类未知、细胞生长增殖所必需的物质,满足细胞对未知营养成分的需求。培养基的构成:合成培养基+血清等天然成分1.营养一般使用液体培养基,也称为培养液。
一、动物细胞培养的条件2.无菌、无毒的环境无菌①对培养液和所有培养用具进行灭菌处理②在无菌环境下进行操作无毒定期更换培养液1、定期更换培养液的目的是什么?以便清除代谢物,防止细胞代谢物积累对细胞自身造成危害2、如何防止培养过程中的微生物污染?在细胞培养液中添加一定量的抗生素
一、动物细胞培养的条件3.温度、pH和渗透压多数动物细胞生存的适宜pH为________①适宜的温度:36.5±0.5℃7.2-7.4维持细胞正常的形态和功能哺乳动物细胞培养的温度多以___________为宜;维持适宜渗透压的目的______________________②适宜的pH:③适宜的渗透压:
一、动物细胞培养的条件4.气体环境动物细胞培养所需气体主要有_____和______用培养皿或松盖培养瓶,在含有_______________和__________的混合气体的__________O2CO2细胞代谢所必需的维持培养液的pH95%空气5%CO2CO2培养箱①组成不同气体的作用是什么?②培养仪器(95%)O2:(5%)CO2:
二、动物细胞培养的过程合作探究:请同学们自主阅读教材P44-45,小组合作思考讨论完成问题。1.体外培养动物细胞有哪些类型?2.简述动物细胞培养的过程。3.什么是细胞贴壁?什么是接触抑制?4.什么是原代培养和传代培养?5.为什么要进行分瓶培养?怎么处理?6.动物细胞培养与植物组织培养有什么相同之处与不同之处?
二、动物细胞培养的过程(一)动物细胞培养的类型第1类:悬浮生长细胞第2类:贴壁生长细胞(主流)悬浮培养瓶能够悬浮在培养液中生长增殖。需要贴附于某些基质表面才能生长增殖。
二、动物细胞培养的过程传代培养放入CO2培养箱中培养取动物组织制成细胞悬液转入培养液进行原代培养放入CO2培养箱中培养取动物组织分散成单个细胞制成细胞悬液原代培养传代培养
二、动物细胞培养的过程取动物组织分散成单个细胞制成细胞悬液原代培养传代培养取动物组织一般取材于动物胚胎或幼龄动物的组织、器官。细胞分化程度低,增殖能力强,容易培养。(1)取材对象:(2)取材原因:1.取动物组织(二)动物细胞培养的过程
长时间会分解细胞膜蛋白,破坏细胞结构,注意控制时间和酶用量。二、动物细胞培养的过程取动物组织分散成单个细胞制成细胞悬液原代培养传代培养(1)原因:①从动物体取出的成块组织中,细胞与细胞靠在一起,彼此限制了生长和增殖。②利于细胞与培养液充分接触,更易进行物质交换。2.分散成单个细胞(2)怎样将动物组织分散成单个细胞?机械方法或用胰蛋白酶、胶原蛋白酶等处理一段时间。不可以,因为胃蛋白酶的最适PH为1.5左右①用胃蛋白酶可以吗?②胰蛋白酶处理时间过长,会怎样?纤维蛋白、胶原蛋白
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