平菇原生质体脱毒技术规程.pdfVIP

B39

DB1302

唐山市地方标准

DB1302/T353—2013

平菇原生质体脱毒技术规程

2013-07-01发布2013-08-01实施

唐山市质量技术监督局发布

DB1302/T349—2013

前言

本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。

本标准由唐山市质量技术监督局提出。

本标准起草单位：唐山师范学院。

本标准主要起草人：范永山、张运峰、张淑红、李小六。

I

DB1302/T349—2013

平菇原生质体脱毒技术规程

1范围

本标准规定了平菇原生质体脱毒的实验室准备、原生质体制备、原生质体再生、鉴定。

本标准适用于平菇菌种的原生质体脱毒。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是标注日期的引用文件，仅标注日期的版本适用于本

文件。凡是不标注日期的引用文件，其必威体育精装版版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T6682-2008分析实验室用水规格和试验方法

GB/T12728-2006食用菌术语

GB19172-2003平菇菌种

GB/T27405-2008实验室质量控制规范食品微生物检测

NY/T528-2010食用菌菌种生产技术规程

NY/T1743-2009食用菌菌种真实性鉴定RAPD法

NY/T1845-2010食用菌菌种区别性鉴定拮抗反应

JJG552-1988血细胞计数板试行检定规程

DB1302/T306-2011无公害平菇栽培技术规范

3术语和定义

GB/T12728-2006中确定的及下列术语和定义适用于本文件。

3.1平菇

指层菌纲伞菌目侧耳科侧耳属的主要品种。

3.2初始菌株

保存于PDA斜面或其它适合培养基内的平菇带毒菌株。平菇病毒病病原和症状见附录A。

3.3原生质体

脱去细胞壁的植物、真菌或细菌细胞。

3.4稳渗剂

用于维持原生质体形状和功能的渗透压稳定剂。

3.5再生菌株

指原生质体经过培养获得的单菌落。

3.6脱毒菌株

1

DB1302/T349—2013

经过栽培试验，无病毒感染症状的优良再生菌株。

4实验室准备

4.1实验室要求

实验室质量控制规范应符合GB/T27405-2008的规定。

4.2仪器和设备

4.2.1超净工作台：无菌风的纯度≤0.5个/皿•时(φ90mm培养平皿)，风速可调。

4.2.2高压蒸汽灭菌器：温度可控制在121℃。

4.2.3水浴锅：温度可控制在25℃～50℃。

4.2.4气浴恒温振荡培养箱：温度可控制在10℃～50℃，转速0～200rpm。

4.2.5光学显微镜：放大倍数400倍。

4.3试剂

应使用分析纯试剂，水为GB/T6682-2008规定的水。

4.3.1稳渗剂

0.6mol/L甘露醇（pH7.0）。配制后在高压蒸汽灭菌器中121℃灭菌20min。

4.3.2细胞壁降解酶

应采用溶壁酶（Lywallzyme）。

4.4培养基

4.4.1PD液体培养基

称取土豆200g，