《专业医学检测》课件.pptVIP

*************************************PCR技术原理和应用变性（94-96℃）双链DNA解离成单链退火（50-65℃）引物与模板特异性结合2延伸（72℃）DNA聚合酶合成新链循环重复产物指数级扩增聚合酶链反应（PCR）是一种体外扩增特定DNA片段的技术，通过温度循环和热稳定DNA聚合酶实现目标序列的指数级扩增。常见的PCR技术变式包括：实时荧光定量PCR（可实现定量检测）、多重PCR（同时检测多个靶标）、逆转录PCR（用于RNA检测）等。PCR技术在病原体检测、基因诊断、法医鉴定等领域有广泛应用，新冠病毒核酸检测就是基于RT-PCR技术。基因测序技术1第一代测序以Sanger测序为代表，单次可测几百到几千个碱基对，精确度高但通量低2第二代测序高通量并行测序，单次可产生几百万到几十亿个短读长，成本大幅降低3第三代测序单分子实时测序，读长可达几万碱基对，适用于基因组组装和结构变异检测4纳米孔测序通过检测DNA分子通过纳米孔时产生的电信号变化实现测序，设备小型化基因测序技术是读取DNA序列信息的方法，从第一代Sanger测序到第二代高通量测序，再到第三代长读长测序，技术不断发展，使基因组学研究和临床应用成为可能。测序技术在病原体全基因组分析、遗传疾病诊断、肿瘤精准治疗、产前筛查等多个医学领域有重要应用，是精准医疗的重要技术支撑。分子诊断在临床中的应用病原体检测利用PCR等技术快速精确地检测和鉴定病原微生物，尤其适用于难以培养或生长缓慢的病原体。常用于呼吸道病毒、肝炎病毒、结核杆菌等检测，可大幅缩短诊断时间。遗传病诊断检测与遗传病相关的基因突变，包括单基因疾病（如地中海贫血、苯丙酮尿症）和多基因疾病。可用于产前诊断、新生儿筛查和易感个体识别，实现遗传病的早期干预。肿瘤精准诊疗分析肿瘤相关基因变异，指导靶向治疗药物选择。如EGFR突变检测指导肺癌靶向治疗，HER2扩增检测指导乳腺癌治疗，实现个体化精准治疗，提高治疗效果。分子诊断技术正在改变传统医学诊断模式，使诊断更加快速、精确和个体化。随着技术的发展和成本的降低，分子诊断将在更多临床领域发挥重要作用，推动精准医疗的普及应用。临床输血检验技术血型鉴定确定献血者和受血者的ABO和Rh血型，是安全输血的基础交叉配血试验检测受血者血清中是否存在针对供血者红细胞的抗体，避免输血不良反应不规则抗体筛查检测血清中针对非ABO系统抗原的抗体，预防罕见输血不良反应传染病检测筛查乙肝、丙肝、HIV、梅毒等传染病标志物，确保血液安全临床输血检验是确保输血安全的关键环节，包括血型鉴定、交叉配血试验、不规则抗体筛查和传染病标志物检测等。这些检验确保供受血者之间的血型相容性，防止溶血反应和传染病传播。现代输血检验技术已从传统的试管法发展到微柱凝胶法和自动化技术，提高了检测的准确性和效率。ABO血型鉴定O型A型B型AB型ABO血型系统是临床输血最重要的血型系统，由H基因控制的H物质和A、B基因控制的A、B转移酶共同决定。血型鉴定包括红细胞正定型（检测红细胞表面抗原）和血清反定型（检测血清中的抗体）两部分，两者结果必须相符才能确定血型。正定型使用抗-A和抗-B血清，反定型使用A型和B型红细胞。常用方法包括载玻片法、试管法和微柱凝胶法。血型鉴定错误可能导致严重的输血不良反应，必须严格执行操作规程，确保结果准确。Rh血型检测Rh血型系统Rh系统是继ABO系统后第二重要的血型系统，有D、C、c、E、e五种主要抗原，其中D抗原最重要根据红细胞表面是否有D抗原，分为Rh阳性（D+）和Rh阴性（D-）中国人群中Rh阳性比例约为99.7%，Rh阴性约为0.3%检测方法使用抗-D血清与被检红细胞反应，观察是否发生凝集常规检测方法包括：试管法：标准方法，敏感性好微柱凝胶法：操作简便，结果稳定固相法：适合自动化检测Rh血型检测对输血安全和预防新生儿溶血病具有重要意义。Rh阴性个体如接受Rh阳性血液输注可能产生抗-D抗体，导致后续输血时发生严重溶血反应。Rh阴性孕妇怀Rh阳性胎儿时，可能发生新生儿溶血病，需进行特殊监测和预防。交叉配血试验标本准备分别收集供血者和受血者的血液样本，制备红细胞悬液和血清主侧试验将受血者血清与供血者红细胞混合，检测受血者血清中是否有针对供血者红细胞的抗体次侧试验将供血者血清与受血者红细胞混合，检测供血者血清中是否有针对受血者红细胞的抗体结果判断观察是否有凝集现象，主侧阳性者不应输血，次侧阳性但主侧阴性者可考虑输注洗涤红细胞交叉配血试验是输血前必须进行的检验，目的