微生物检测基础知识讲义.pptVIP

c巴氏消毒主要用于葡萄酒,啤酒及牛奶的消毒.这种方法可以杀死食品中常见的病原菌,及其他微生物的繁殖体,而有不损失食品中的营养物质b流通蒸汽灭菌利用流通蒸汽灭菌器或蒸笼进行灭菌的一种方法.每天蒸煮一次每次30分钟,连续三天,又称为间歇灭菌.主要用于实验室一些不耐高温的培养基及其它液体材料d煮沸消毒010203将液体材料加热煮沸至近100℃,维持10-20分钟可以杀死所有的细菌繁殖体,但不可能杀死全部芽孢.此法多用于实验室小件器械的临时消毒.a.不同的微生物或同种微生物的不同菌龄对高温的敏感性不同。多数微生物的营养体和病毒在50~65℃，10分钟就会被杀死；但各种孢子、特别是芽孢最能抗热，其中抗热性最强的是嗜热脂肪芽孢杆菌，要在121℃，12分钟才被杀死。对同种微生物来讲，幼龄菌比老龄菌对热更敏感。微生物的数量多少显然会影响灭菌的效果，数量越多，热死时间越长。培养基的成分与组成也会影响灭菌效果。一般地讲，蛋白质、糖或脂肪存在，则提高抗热性，pH在7附近，抗热性最强，偏向两极，则抗热能力下降，而不同的盐类可能对灭菌产生不同的影响；固体培养基要比液体培养基灭菌时间长。01021.10无菌操作原则1用于防止微生物进入人体组织或其它无菌范围的操作技术称为无菌操作。如外科手术需防止细菌进入伤口.2在各种生物实验中,为了防止微生物的生长和繁殖影响实验的进行,也要在无菌的环境下进行.无菌操作的要求是:1操作前将界面上的细菌和病毒等微生物杀灭2操作过程中是界面与外界隔离,避免微生物的侵入01沾有病原微生物的器材，应置于指定地点。废弃物应用5%苯酚浸泡。实验前，无菌室应打开紫外线灯灭菌30分钟以上,实验中应穿工作衣帽.严格无菌操作，接种针、接种环在使用前后都必须火焰灼烧。实验前后用75%（v/v）酒精对手消毒。0203041.11革兰氏染色

革兰氏染色法将细菌分为革兰氏阳性和革兰氏阴性,是由这两类细菌细胞壁的结构和组成不同决定的.G＋菌：细胞壁厚，肽聚糖网状分子形成一种透性障，当乙醇脱色时，肽聚糖脱水而孔障缩小，透性降低,故保留结晶紫-碘复合物不易被洗脱而保留在细胞膜上。呈紫色Gˉ菌：肽聚糖层薄，交联松散，乙醇脱色不能使其结构收缩，其脂含量高,乙醇将脂溶解，细胞壁透性加大，结晶紫-碘复合物溶出细胞壁，沙黄复染后呈红色革兰氏染色法一般包括初染、媒染、脱色、复染等四个步骤，具体操作方法是：涂片固定。取菌种培养物常规涂片,干燥,固定.草酸铵结晶紫染1分钟。自来水冲洗。加碘液覆盖涂面染1分钟。水洗，用吸水纸吸去水分。加95%酒精数滴，并轻轻摇动进行脱色，10秒后水洗，吸去水分。1滴加沙黄复染液复染1分钟后，自来水冲洗。干燥，镜检。2染色的结果，革兰氏阳性菌体都呈紫色，阴性菌体都呈红色321显微镜是检验工作中常用的贵重和精密仪器，对它的使用和保护必须十分重视。用显微镜观察标本时要两眼睁开（如开始不习惯，可以一手掩目，不可闭眼）姿势：使用显微镜时必须端坐，凳和桌高度适宜。显微镜应直立在桌上，不可将镜臂弯曲而使载物台倾斜，油液或菌液将流散而影响观察和污染。310显微镜的使用方法01光源：通常用日光灯或天然光线，不用直射日光，以免眼睛和镜头受损。若使用显微镜灯时，最好加以蓝色滤光片，以除去黄光的影响。02光线的强弱可通过聚光器的升降、光圈的大小及反光镜的平面或凹面来调节，光线的适当运用是项重要的基本功。检查：低倍镜：一般先用低倍镜开始观察标本，先从侧面注视镜头，用粗调节将物镜下旋到底或降到将接触标本时，再用左眼注视目镜中，旋转粗调节器，至视野中出现物象时，最后用细调节器使形象清晰。高倍境：低倍镜调节清晰后，换上高倍境，稍加调节，即可进行观察，要避免细菌悬液等污染镜头。油镜：检查细菌常用油镜。使用油镜时要升高聚光镜，放大光圈，调节反光镜，使射入镜筒之光线最强。01于载玻片上滴加镜油（香柏油）一滴，使接物镜下降和镜油接触（将触及载玻片）。注视目镜，转动粗调节器，使物镜上升少许，见到标本后，左手转动细调节器，使物象清晰；右手掌握移动器，检查标本。02用油镜观察标本时，切勿用粗调节器下目镜，以免压碎标本片，损坏油镜头。油镜使用完毕，须用擦镜纸将镜头拭净。03加镜油的原理：主要是避免部分光线折射的损失。因油镜的折射率和玻片的折射率相近，而与空气的折射率相差较多，所以使用镜油的目的是将镜头的镜面和玻片之间的空间为镜油所充满，这样绝大部分光线可进入镜面内，使视野明亮，便于观察。0102移动显微镜时，一般右手握住镜臂，左手托住镜座，不可倒立，以免损坏。显微镜要保持清洁，镜头上如有油污时，须用擦镜纸蘸取少许二甲苯轻轻擦拭，然