醋酸薄膜电泳.ppt

白蛋白α1球蛋白β球蛋白α2球蛋白点样线Γ球蛋白第23页，共33页，星期日，2025年，2月5日取试管6支，编号如下四、定量(两人的膜条共用)试管编号Aα1α2βγ00.4mol/LNaOH6.0ml3.0ml3.0ml3.0ml3.0ml3.0ml蛋白条带清蛋白α1球蛋白α2球蛋白β球蛋白γ球蛋白无蛋白区充分振荡、脱净染料比色650nm、定量15min第24页，共33页，星期日，2025年，2月5日关于醋酸薄膜电泳第1页，共33页，星期日，2025年，2月5日1、掌握电泳法分离蛋白质的原理2、熟悉醋酸纤维素薄膜电泳的操作、注意事项3、熟悉测定血清中各种蛋白质相对百分含量的方法4、了解A\G的临床意义实验目的第2页，共33页，星期日，2025年，2月5日分离蛋白质的方法分离方法沉淀法盐析法有机溶剂沉淀法层析法电学法电泳法等电聚焦超速离心法离子交换层析吸附层析凝胶过滤（分子筛）亲和层析第3页，共33页，星期日，2025年，2月5日电泳依据分子或颗粒所带电荷、形状、大小等不同，因而在电场介质中移动速度不同，从而达到分离的技术。一、电泳第4页，共33页，星期日，2025年，2月5日H＋OH－H＋OH－pHpIpH=pIpHpI阴离子，向正极移动阳离子，向负极移动第5页，共33页，星期日，2025年，2月5日电泳速度:带电粒子在电场中运动时，单位电场强度内粒子运动的速度，以u表示，即V—粒子运动的速度X—电场强度Q—粒子所带电荷r—粒子的半径η—介质的粘度第6页，共33页，星期日，2025年，2月5日二、电泳的影响因素分离样品的性质电泳介质的pH缓冲液的离子强度电场强度电渗作用第7页，共33页，星期日，2025年，2月5日电渗作用在电场中液体对固体支持物的相对移动.如果样品原本是移向负极的，则泳动的速度加快；如果样品原本是移向正极的，则泳动的速度减慢。负极正极－－－－－－－－表面带负电荷带正电荷的水层携带粒子向负极移动＋＋＋＋＋＋＋＋第8页，共33页，星期日，2025年，2月5日三、电泳的分类支持介质不同纸电泳（Paperelectrophorisis）醋酸纤维薄膜电泳（CelluloseAcetateelectrophoresis）琼脂凝胶电泳（AgarGelelectrophoresis）聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS－PAGE）第9页，共33页，星期日，2025年，2月5日支持介质装置形式不同：⑴平板式电泳；??⑵垂直板式电泳；??⑶垂直柱式电泳pH的连续性不同：连续pH电泳非连续pH电泳第10页，共33页，星期日，2025年，2月5日血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳Celluloseacetatemembraneelectrophoresisofserumproteins第11页，共33页，星期日，2025年，2月5日本实验以醋酸纤维膜为电泳支持物，分离各种血清蛋白。醋酸纤维膜是由醋酸纤维加工制成的一种细密且薄的微孔膜。广泛应用于医学临床中各种生物分子的分离分析中。实验原理第12页，共33页，星期日，2025年，2月5日醋酸纤维素较纸电泳的优点电渗作用影响小醋酸纤维素膜对蛋白的吸附小，几乎无“拖尾”。由于醋酸纤维素亲水性小，所容纳的缓冲液也较少，电流大部分是由样品传导，所以分离速度快。醋酸纤维素是纤维素（纸）的醋酸酯第13页，共33页，星期日，2025年，2月5日血清蛋白质清蛋白和球蛋白清蛋白和α1、α2、β、γ-球蛋白电泳第14页，共33页，星期日，2025年，2月5日血清蛋白的等电点pI大多在7.5以下，在pH为8.6的巴比妥缓冲液中以负离子形式存在，并且蛋白质的分子量、立体构象、等电点及形状也有差异，在电场中迁移速率不同，可以在