细菌的生化试验.ppt

第三碳源利用试验枸橼酸盐利用试验C阴性C阳性在枸橼酸盐培养基中，细菌能利用的碳源只有枸橼酸盐，分解后生成碳酸钠，使培养基变碱性，pH指示剂溴麝香草酚蓝由淡绿色变为深蓝色。能利用枸橼酸盐作为碳源的细菌也可利用氮源。第20页，共42页，星期日，2025年，2月5日第四呼吸酶类试验硝酸盐还原试验硝酸盐还原反应包括两个过程：即细菌在合成代谢过程中，硝酸盐还原为亚硝酸盐和氨，由氨转化为氨基酸和细胞内其它含氮化合物；细菌在分解代谢过程中，硝酸盐或亚硝酸盐代替氧作为呼吸酶系统中的终末受氢体。硝酸盐还原的过程可因细菌不同而产物各异，有的细菌仅使硝酸盐还原为亚硝酸盐；有的细菌可使其还原为亚硝酸盐和离子态的铵；有的细菌还能使硝酸盐或亚硝酸盐还原为氮；有的细菌还可以将其还原产物在合成代谢中完全利用。硝酸盐或亚硝酸盐如果还原生成气体的终末产物，如氮和氧化氮，称为脱硝化作用。第21页，共42页，星期日，2025年，2月5日硝酸盐还原试验是测定还原过程中生成的亚硝酸。硝酸盐还原试验阴性阳性第22页，共42页，星期日，2025年，2月5日氧化酶试验【原理】氧化酶又称细胞色素氧化酶，能将还原型细胞色素C氧化形成水和氧化型细胞色素C，氧化型细胞色素C再使四甲基对苯二胺氧化，形成显色反应。第23页，共42页，星期日，2025年，2月5日氧化酶试验【试剂与器材】1．菌种大肠埃希菌、铜绿假单胞菌2．试剂氧化酶试剂（1%四甲基对苯二胺）3．器材2cm×2cm滤纸片、污物缸第24页，共42页，星期日，2025年，2月5日氧化酶试验【操作步骤】1．将滤纸片叠成四方块状。2．用滤纸片的中心尖角小心刮取大肠埃希菌菌落，注意不可碰到培养基。3．轻轻展开滤纸片，刮取的菌落正好在滤纸片中心，滴加一滴1%四甲基对苯二胺。4．立刻观察菌落颜色的变化。5．同法做铜绿假单胞菌的氧化酶试验。第25页，共42页，星期日，2025年，2月5日氧化酶试验【结果】滴加氧化酶试剂后铜绿假单胞菌立刻变为紫色，为氧化酶阳性。大肠埃希菌不变色，为氧化酶阴性。氧化酶试验（左侧为铜绿假单胞菌、右侧为大肠埃希菌）第26页，共42页，星期日，2025年，2月5日氧化酶试验【注意事项】1．实验中的菌种要求新培养的，不宜用陈旧的培养物。2．刮取细菌时不可碰到培养基，不可用接种环等金属物品取菌。3．氧化酶试剂要新鲜配制，一般装在棕色瓶中，放在冰箱中可保存一周，时间长了易被空气氧化变色。4．结果要立刻观察，1min内变色者为阳性，超过1min变色的为阴性。5．在滤纸片上滴加试剂时不要过多，以刚润湿纸片为宜，如滤纸片过湿，可能妨碍空气与细菌接触，延长反应时间，造成假阴性。第27页，共42页，星期日，2025年，2月5日过氧化氢酶试验【原理】过氧化氢酶试验又称触酶试验。部分细菌含有黄素蛋白，在代谢过程中与空气中的氧发生反应，形成过氧化氢，过氧化氢对细菌有毒害作用，会破坏细胞组分，因此，细菌为保护自己，通常具有过氧化氢酶，可以催化裂解过氧化氢，形成水和氧气。第28页，共42页，星期日，2025年，2月5日过氧化氢酶试验【试剂与器材】1、菌种金黄色葡萄球菌2、试剂3%过氧化氢3、器材载玻片、无菌移液器吸头、酒精灯、火柴、超净工作台第29页，共42页，星期日，2025年，2月5日过氧化氢酶试验【操作步骤】1、在载玻片中央滴加一滴3%过氧化氢。2、用无菌移液器吸头蘸取少量细菌，在3%过氧化氢中混匀。【结果】观察气泡的产生情况。可以看见在吸头上金黄色葡萄球菌菌苔周围，产生大量气泡，为过氧化氢酶阳性。如果菌苔周围无气泡产生，为过氧化氢酶阴性。第30页，共42页，星期日，2025年，2月5日第1页，共42页，星期日，2025年，2月5日第2页，共42页，星期日，2025年，2月5日第3页，共42页，星期日，2025年，2月5日细菌的基本鉴定技术生化反应鉴定：通过观察细菌利用酶和降解糖类、醇类、脂类、蛋白质和氨基酸的能力可以了解其生化活性，从而识别和鉴定细菌。免疫学鉴定（血清学鉴定）编码鉴定第4页，共42页，星期日，2025年，2月5日第一碳水化合物代谢试验一、糖（醇、苷）类发酵试验：原理：各种细菌含有发酵不同糖类的酶，分糖类的能力各不相同，且不同细菌分解同一种糖的代谢产物也不一定相同。第5页，共42页，星期日，2025年，