DB36T-黑斑蛙米尔伊丽莎白菌分离鉴定技术规范编制说明.doc

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关于《黑斑蛙米尔伊丽莎白菌分离鉴定技术规范》

地方标准编制说明

工作简况

（一）任务来源

根据《江西省市场监管局关于下达2022年第六批江西省地方标准制修订计划的通知》（赣市监标函〔2022〕24号）的任务安排，江西省农业科学院畜牧兽医研究所等单位承担了《黑斑蛙米尔伊丽莎白菌分离鉴定技术规范》地方标准（计划编号：DB36-2022-6-25）的起草工作。

（二）起草单位情况

江西省农业科学院畜牧兽医研究所

南昌大学

江西省农业技术推广中心

（三）主要起草人(以表格形式将内容明确)

姓名

工作单位

项目分工

刘文舒

江西省农业科学院畜牧兽医研究所

主要起草者

王玉柱

江西省农业科学院畜牧兽医研究所

主要起草者

郭小泽

江西省农业科学院畜牧兽医研究所

主要起草者

李思明

江西省农业科学院畜牧兽医研究所

主要起草者

简少卿

南昌大学

主要起草者

李小勇

江西省农业技术推广中心

参与试验

陈彦良

江西省农业科学院畜牧兽医研究所

参与试验

唐艳强

江西省农业科学院畜牧兽医研究所

参与试验

肖海红

江西省农业科学院畜牧兽医研究所

参与试验

制定（修订）标准的必要性和意义(重要项、需充分说明)

（一）必要性

近年来，我省黑斑蛙养殖产业迅猛发展，蛙类产量居全国首位。但高密度模式下黑斑蛙免疫力低，各种疾病频发且传播速度快，尤其是类似脑膜炎的“歪头病”。该病传染性极强，死亡率高，给黑斑蛙的养殖造成了巨大的经济损失。经研究发现米尔伊丽莎白菌为该病主要病原，米尔伊丽莎白菌（Elizabethkingiamiricola）是一种革兰氏阴性菌，2016年以来，我省多地的养殖黑斑蛙都爆发了类似脑膜炎的“歪头病”。该病传染性极强，死亡率高，主要症状表现为歪头、白内障、失去定向能力，最终死亡，给黑斑蛙的养殖造成了巨大的经济损失。

研究发现黑斑蛙“歪头病”病原为米尔伊丽莎白菌，为黑斑蛙肠道内共生的条件致病菌，可以在蛙类间广泛传播，且耐药性极强。但是关于该菌分离、鉴定技术规范不足，实际生产过程中，一些养殖户乱用药、乱投医，用药过量甚至使用违禁药物的现象，不仅给环境造成巨大压力的同时也引发了药物残留超标的食品安全问题。因而只有在发病初期做好该病原菌的分离与鉴定，进而进行抗生素、中草药等敏感性分析，才能选择合适的药物和合理浓度来预防该病的发生，保障产业的可持续发展。

（二）目的与意义

本技术规范是通过病原分离培养、分子生物学鉴定等手段，可以达到鉴定米尔伊丽莎白菌的目的。

编制该规范的意义在于提供黑斑蛙养殖中导致“歪头病”的米尔伊丽莎白菌的分离、鉴定方法，为针对性药物的筛选奠定基础，减少药物滥用，减低成本，提高产品质量安全。

目前，我国以及江西省还没有黑斑蛙米尔伊丽莎白菌分离鉴定相关标准，亟需出台相关技术规程标准予以规范引导“歪头病”病原的鉴定与防治。本标准在编制过程中，尽量直接引用的方式或修改引用相关国家标准、行业标准主要技术内容，确保与相关国家标准、行业标准相协调、相衔接。

主要起草过程(必要项)

“十三五”期间本团队承担了国家重点研发计划课题《丘陵地区梯田生态立体养殖技术集成与示范》（2018YFD0901703）、江西省农业农村厅的《江西省现代农业产业技术体系项目》（JXARS-10）、江西省重点研发计划《天然植物提取物在黑斑蛙疾病绿色防控中的开发与应用》、江西省协同创新项目等相关任务，涉及到黑斑蛙“歪头病”病原分离和鉴定等工作。

项目组依托上述项目支持，紧密结合生产实际问题，针对黑斑蛙病害最为突出的“歪头病”进行病原菌的分离和耐药性调查，我们分离鉴定出一株“歪头病”病原菌米尔伊丽莎白菌JX27（已保藏于中国典型培养物保藏中心），发现其对30种抗菌药物仅有6种敏感，5种中度敏感，19种耐药。与其他地区分离的米尔伊丽莎白菌耐药性结果比较发现耐药性存在地域差异。因此，在实际生产中不根据药敏结果用药，可能根本不能起到疾病防治的效果。

表1不同抗菌药物对JX27的抗菌活性

抗生素

含药量(μg/片)

直径（mm）

敏感程度

抗生素

含药量(μg/片)

直径（mm）

敏感程度

1头孢他啶

0

R

16卡那霉素

0

R

2头孢呋辛

0

R

17庆大霉素

0

R

3头孢拉定

0

R

18丁胺卡那

0

R

4头孢唑啉

0

R

19头孢哌酮

17

S

5头孢氨苄

0

R

20头孢曲松

13

R

6哌拉西林

12

I

21克林霉素

21

S

7羧苄西林

12

I

22氯霉素

32

S

8氨苄西林

0

R

23呋喃唑酮

0

R

9苯唑西林

0

R

24复方新诺明

0

R

10青霉素

0

R

25多粘菌素B

0

R

11红霉素

12

I

26万古霉素

14

I

12米诺环素

23

S

27环丙沙星

0

R

13多西环素

18

S

28氧氟沙星

11

I

14四环