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细胞工程是指应用细胞生物学、分子生物学和发育生物学等多学科的原理和方法,通过细胞器、细胞或组织水平上的操作,有目的地获得细胞、组织、器官、个体或其产品的一门综合性的生物工程。;1902年,哈伯兰特提出了细胞全能性的理论,但相关的实验尝试没有成功;;问题探讨;一植物细胞工程的基本技术;细胞全能性;受精卵;实例

(1)表现出全能性的例子

(2)未表现出全能性的例子;思考:

1.是不是所有的活细胞都具有全能性?

2.种子发育成植株体现了全能性了吗?

3.细胞具有的全能性一定能表现出来吗?

;高度分化的植物组织细胞,如叶片和花瓣的细胞还能不能在适宜的条件下表现出全能性呢?;早在1902年,哈伯兰特(Haberlandt)提出高等植物的器官和组织可以不断地分割,直至单个细胞的观点,预言植物体细胞在适宜的条件下有发育成完整植株的潜力,提出了植物细胞全能性的设想,并且用植物细胞组织进行了培养实验。他虽然未能获得再生植株,却是植物组织培养的开创者。1902年他发表了著名论文《植物细胞离体培养实验》,论文中提出的“植物细胞全能性”理论成为植物组织培养的理论基础。从哈伯兰特提出植物细胞全能性理论,到1958年斯图尔德(F.C.Steward)等人用胡萝卜根的韧皮部细胞证实了植物细胞的全能性,科学家们用了整整56年。;植物组织培养;外植体;(1)脱分化

①概念

在一定的____和____等条件的____下,________的细胞___________________,转变成___________的过程;

②实质

____________________________________________

③结果:___________

*愈伤组织的特点:_________________

④光照条件:_______________

⑤过程中涉及的生命活动

__________________________________________;(2)再分化

①概念

________能重新_____成____________的过程;

②实质

______________

③结果

__________________________________________

④光照条件:_________________________

为什么?_____________________________________

⑤过程中涉及的生命活动

__________________________________________;;2.材料用具

①外植体:_______________

*经常选择根尖(分生区)、茎的韧皮部(形成层)等分裂能力强、分化程度低的区域作为材料,容易诱导形成愈伤组织;

②体积分数为70%的酒精

*对手、超净工作台、外植体进行消毒

③质量分数为5%左右的次氯酸钠溶液

*对外植体进行消毒

④无菌水

*清洗外植体

⑤培养基(参见本书附录1)

*包括无机营养成分(水和无机盐)、有机营养成分(蔗糖、氨基酸、维生素等)、特定浓度和比例的激素(主要是生长素和细胞分裂素);

*蔗糖的作用:提供能量,调节渗透压

*培养基灭菌方法为:___________;思考:

组培过程中较易染菌,因此应在实验前应确定培养基灭菌彻底,如何确定?

;3.方法步骤

;将消过毒的外植体置于无菌的培养皿中;

在酒精灯火焰旁,将外植体的1/3-1/2插入诱导愈伤组织的培养基中。用封口膜或瓶盖封盖瓶口,并在培养瓶上作好标记;;思考:

1.为什么整个过程要保证无菌操作?

2.为什么外植体不能倒插?(了解)

;

将接种了外植体的锥形瓶或植物组织培养瓶置于18-22℃的培养箱中培养。在培养过程中,定期观察和记录愈伤组织的生长情况;;

;

移栽前先打开封口膜或瓶盖,让试管苗在培养箱内生长几日。用流水清洗掉根部的培养基后,将幼苗移植到消过毒的蛭石或珍珠岩等环境中,待其长壮后再移栽入土。每天观察并记录幼苗的生长情况,适时浇水、施肥,直至开花。;?菊花的组织培养(视频已嵌入);菊花的组织培养—基本过程;4.结果分析与评价

①接种3-4d后,检查外植体的生长情况,统计有多少外植体被污染,试分析它们被污染的可能原因:

②从刚接种的外植体到长出愈伤组织需经历多少天?

③培育的试管苗能直接移栽到露地吗?应如何操作?

;4.结果分析与评价

④若想探究生长素与细胞分裂素的使用比例对植物组织培养的影响,则应如何设计对照实验?

;特殊的植物组织培养——花药离体培养;原理

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