微生物的实验室培养常见问题解答.docxVIP

微生物的实验室培养常见问题解答

1.什么叫培养基？琼脂是什么性质？有哪些作用？

人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质

在常规培养条件下呈现固态

只起凝固作用，微生物不能利用

2.培养基的种类，按物理性质可分为哪些？他们各自有哪些作用？在实验室中最常用的培养基是哪种？

培养基按物理性质分为液体培养基和固体培养基

液体培养基：选择培养/扩大培养/富聚培养，工业生产菌种的大量繁殖（目的是增加目的菌的数量）

固体培养基：分离、鉴定、活菌计数和保藏菌种

3.培养基的种类，按用途可以分为哪些？请举例说明。

按用途分为选择培养基和鉴别培养基

选择培养基：①加入某种化学物质：a.加抗生素筛选出真菌（如酵母菌、霉菌）和耐药菌

b.加高浓度食盐筛选出金黄色葡萄球菌（耐盐突变体细菌）

②改变培养基中营养成分：a.缺乏氮源时筛选出固氮微生物

b.缺乏碳源时筛选出自养微生物

c.以石油为唯一碳源时筛选出分解石油的微生物

d.以纤维素为唯一碳源时筛选出分解纤维素的微生物

e.以尿素为唯一氮源时筛选出分解尿素的微生物

③改变微生物培养条件：a.将培养基放在高温环境培养筛选出耐高温的微生物

b.用普通培养基在无氧条件下培养筛选出厌氧型和兼性厌氧型微生物

鉴别培养基：伊红美蓝培养基鉴别大肠杆菌（菌落呈现黑色）

4.培养基中配方成分主要有哪些？如何通过培养基的营养组成判断微生物的同化类型？

一般都含有水、碳源、氮源和无机盐

自养型微生物的培养基主要以无机营养为主；异养型微生物的培养基主要以有机营养为主

5.培养基在满足主要营养物质的基础上，还需要满足什么条件？

还需要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的要求

6.培养乳酸杆菌时，还需要在培养基中添加什么？培养细菌时的PH？培养霉菌呢？培养厌氧型微生物呢？

培养乳酸杆菌时添加维生素

培养细菌时将pH调至中性或微碱性；培养霉菌时将pH调至酸性

培养厌氧微生物时要提供无氧的条件

7.牛肉膏和蛋白胨的功能是什么？主要能提供哪些营养物质？

功能：提供营养物质和能量

牛肉膏提供的主要营养物质是碳源、氮源、维生素、磷酸盐

蛋白胨提供的主要营养物质是碳源、氮源、维生素

8.获得纯净培养物的关键是？

防止外来杂菌的入侵

9.对实验操作的空间、操作者的衣着和手要进行什么操作？

消毒和灭菌

10.用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基要进行什么操作？

灭菌

11.实验操作应在什么附近进行？

酒精灯火焰附近进行

12.消毒和灭菌的定义分别是什么？实验室常用的消毒和灭菌的方法分别是什么？

消毒消毒：用较为温和的物理或化学方法杀死物体表面或内部的部分微生物，不包括芽孢和孢子

常用方法：煮沸消毒法、牛奶用巴氏消毒法、化学药剂消毒法、紫外线消毒法

灭菌灭菌：用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子

常用方法：灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸汽灭菌

13.为什么常用70%酒精作为消毒剂？需要灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸汽灭菌的分别有哪些？

70%的酒精杀菌效果最好，浓度过高，会使菌体表面蛋白质变性过快而凝固成一层保护膜，酒精不能渗入其中；浓度过低，杀菌能力减弱

灼烧灭菌：接种环、接种针、试管口、瓶口

干热灭菌：培养皿、试管、吸管等耐高温、需保持干燥的物品

高压蒸汽灭菌：如培养基、无菌水

14.培养基丢弃之前要做什么操作？为什么？

灭菌防止污染环境或感染操作者

15.高压蒸汽灭菌为达到良好的灭菌效果，压力为多少？温度为多少？维持多长时间？高压蒸汽灭菌锅的正确使用方法是什么？

100千帕，121摄氏度，15-30分钟

16.高压蒸汽灭菌中，把锅内的水加热煮沸的原因是什么？不这样做会引起什么结果？

将锅内的冷空气彻底排除，不然会导致温度达不到121摄氏度

17.紫外线消毒在照射前需要喷洒什么可以加强消毒效果？

石炭酸或煤酚皂等消毒液

18.培养牛肉膏蛋白胨培养基的流程是什么？如果要调节PH，需在哪步操作之前？

计算→称量→溶化→(调节pH)→灭菌→倒平板先调PH-分装-后灭菌

19.为什么称取时动作要迅速？

牛肉膏、蛋白胨都易吸潮

20.溶化过程中不断用玻璃棒搅拌的作用是什么？

防止琼脂糊底而导致烧杯破裂

21.培养基灭菌后为什么要冷却到50摄氏度左右才能用来倒平板？用什么来估计培养基的温度？

温度过高烫手，温度过低琼脂会凝固而倒不出

用手摸不烫手温度大约在50摄氏度左右

22.为什么要在酒精灯火焰附近进行倒平板？为什么锥形瓶瓶口要通过火焰？

营造一个无菌区，防止杂菌侵入污染

通过灼烧灭菌防止外瓶口微生物污染培养物

23.如果不小心将培养基溅到皿盖和皿底之间的部位，这个培养基还能用来培养微生物吗？为什么？

不能，空气中的微生物可能皿盖与皿底之间的培养基上滋生

24.倒平板操作中，平板冷却凝固后还需要