食品微生物学检验大肠埃希氏菌计数解读课件.pptx

食品微生物学检验大肠埃希氏菌计数解读20XX主讲人：202X.X齐某时间：

检验结果解读与应用04检验方法局限性与改进05目录CONTENTS检验标准与适用范围01MPN计数法操作流程02平板计数法操作流程03

PART.01检验标准与适用范围

标准方法概述本标准规定了食品中大肠埃希氏菌计数的方法，涵盖两种计数法，适用于不同含量的食品检测。

明确指出第一法适用于大肠埃希氏菌含量较低的食品，第二法适用于含量较高的食品，但不适用于贝类及产品。检验原理阐释大肠埃希氏菌在44.5℃发酵乳糖产酸产气，具有β-葡萄糖醛酸苷酶活性，能分解特定底物，在TBX琼脂上形成蓝绿色菌落。

该特性是检验方法的依据，但需注意部分菌株如O157无此活性，且肠杆菌科内其他菌株也可能具有类似活性。标准规定与适用食品

检验需多种设备，如恒温培养箱、冰箱、恒温水浴箱等，温度精度要求高，确保实验条件稳定。

还需天平、均质器、振荡器、试管、吸管等，这些设备和材料是实验操作的基础，影响结果准确性。检验设备要求培养基和试剂包括磷酸盐缓冲液、生理盐水、LST肉汤、EC肉汤、TBX琼脂等，每种都有严格配方和制法。

例如TBX琼脂需将多种成分加热溶解，调节pH后高压灭菌，灭菌后培养基在25℃时的pH为7.2±0.2，保存需密封避光。培养基试剂配制设备材料与培养基试剂

PART.02MPN计数法操作流程

固体、半固体和液体样品稀释方法不同，固体样品需均质处理，液体样品可直接混匀，稀释倍数根据污染状况估计。

稀释过程中需注意无菌操作，避免交叉污染，且稀释液pH需调节至6.5~7.5，以保证后续培养效果。样品稀释步骤初发酵试验需选择适宜稀释度的样品匀液，接种至LST肉汤中，36℃±1℃培养24h±2h，检查产气情况。

产气者进行复发酵试验，未产气者继续培养至48h±2h，仍未产气则判断为阴性，整个过程需严格控制时间。初发酵试验要点0102样品稀释与初发酵

复发酵试验操作产气的LST肉汤管需振摇后转种至EC肉汤管中，44.5℃±0.2℃水浴培养24h±2h，再次检查产气情况。

若未产气则继续培养至48h±2h，记录产气管数，此步骤进一步筛选大肠埃希氏菌，减少假阳性。确认试验关键产气的EC肉汤管取培养物划线接种于TBX琼脂平板，36℃±1℃培养18h~24h，观察菌落颜色。

蓝绿色菌落为大肠埃希氏菌阳性，此步骤通过菌落特征最终确认菌种，确保结果准确可靠。复发酵与确认试验

PART.03平板计数法操作流程

接种培养要点将冷却至48℃±2℃的TBX琼脂倾注于培养皿中，每皿15mL~20mL，混匀后水平静置凝固，翻转平板后36℃±1℃培养18h~24h。

整个过程需在15min内完成，以保证菌落形成良好，平板菌落数需在15CFU~150CFU之间进行计数。样品稀释要求按MPN计数法稀释样品，选取2~3个适宜稀释度的样品匀液，每个稀释度接种2个无菌培养皿。

同时取磷酸盐缓冲液或生理盐水作空白对照，每皿1mL，以排除培养基本身污染。PART01PART02样品稀释与接种培养

菌落数计算方法若只有1个稀释度平板菌落数在计数范围内，以该稀释度菌落数平均值乘以稀释倍数计算。

若有两个连续稀释度平板菌落数在计数范围内，按公式计算；若所有平板菌落数均大于150CFU或小于15CFU，则按特定规则计算。菌落数小于100CFU时按“四舍五入”修约以整数报告，大于或等于100CFU时按特定规则修约报告。

若空白对照有菌落生长，则检验结果无效，结果需根据取样方式以CFU/g或CFU/mL为单位报告。结果报告规范菌落数计算与结果报告

PART.04检验结果解读与应用

检索表有适用条件，如样品量、稀释倍数等，需根据实际情况调整数值，必要时可乘以100报告每100克（毫升）检样中MPN值。

贝类及产品有单独的MPN检索表，其阳性管数和MPN值范围与普通食品不同，需区分使用。检索表使用注意事项MPN检索表用于根据阳性管数确定每克（毫升）样品中大肠埃希氏菌的最可能数，提供95%可信限。

不同稀释度和阳性管数组合对应不同MPN值，如0.1、0.01、0.001三个稀释度阳性管数为0、0、0时，MPN小于3.0。MPN检索表作用MPN检索表应用

01食品安全评估依据大肠埃希氏菌计数结果可作为食品安全评估的重要指标，含量过高可能表明食品受污染，存在安全隐患。

不同食品标准对大肠埃希氏菌限量有规定，超标食品需采取相应措施，如召回、销毁等，保障公众健康。02质量控制与改进参考企业可通过检验结果监控生产过程卫生状况，查找污染环节，采取改进措施，如加强原料检验、优化生产工艺、强化人员卫生培训等。

检验结果还可用于比较不同批次、不同来源食品的质量，为采购决策、产品优化提供依据。检验结果意义

PART.05检验方法局限性与改进

特异性问