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枸杞中双丙环虫酯的测定液相色谱-串联质谱法

1.范围

本文件规定了枸杞中双丙环虫酯含量的液相色谱-串联质谱测定方法。本文件适用于枸杞中双丙环虫酯含量的测定和确证。

2.规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法。3.术语和定义

本文件没有需要界定的术语和定义。4.原理

样品经混匀，乙腈提取，提取液经分散式固相萃取净化，离心，过滤，液相色谱-串联质谱仪测定，外标法定量。

5试剂和材料

除另有说明，所用试剂均为分析纯，水为符合GB/T6682规定的一级水。

5.1试剂

5.1.1甲酸(HCOOH)：色谱纯。

5.1.2乙腈(CH3CN)：色谱纯。

5.1.3无水硫酸镁（MgSO4）：分析纯。

5.1.4N-丙基乙二胺(N-primarysecondaryamine,PSA)：分析纯。

5.1.5十八烷基键合硅胶吸附剂（C18）：分析纯。

5.1.6氯化钠（NaCl）：分析纯。

5.2溶液配制

5.2.10.1%甲酸水溶液：取100μL甲酸(5.1.1)，用超纯水定容至100mL混合均匀

5.3标准品

双丙环虫酯标准物质：纯度均不低于99%，CAS:915972-17-7。分子式：C33H39NO9。

5.4标准溶液制备

5.4.1标准储备液（10μg/mL）：准确称取适量的标准物质（5.3），用乙腈（5.1.2）制备浓度为10μg/mL的标准储备液，于－18℃冰箱中避光保存。

5.4.2标准中间溶液的配制（1.0μg/mL）：将双丙环虫酯的标准储备液用乙腈配制成质量浓度为1.0μg/mL的标准中间溶液，于－18℃冰箱中避光保存。

5.4.3基质标准工作溶液的配制：移取适当体积的标准溶液，用阴性样品提取液将双丙环虫酯配制成质量浓度为1.0、2.0、5.0、10.0、20.0、50.0ng/mL的标准工作液，现用现配。

6仪器和设备

6.1液相色谱-串联质谱仪：配电喷雾电离源。

6.2分析天平：感量为0.00001g和0.01g。

6.3高速离心机：15000r/min。

6.4涡旋混合器。

6.5具塞塑料离心管。

6.6超声波振荡器。

6.7微孔滤膜（水相）：0.22μm。

7分析步骤

7.1试样制备

将枸杞样本取可食用部分，混合均匀，搅拌破碎，装入密闭洁净容器中标记明示。

7.2试样的提取

称样5g于50mL离心管中，加入5mL水、20mL乙腈、2g氯化钠，垂直振荡5min，4000r/min离心5min。取上清液1mL，加入150mg无水硫酸镁、25mgPSA、25mgC18，涡旋振荡1min，4000r/min离心5min，取上清液0.5mL，加0.5mL0.1%甲酸水溶液1mL，混合均匀，过0.22μm滤膜于进样小瓶中，待测。

7.3仪器参考条件

7.3.1液相色谱参考条件

a)色谱柱：AcquityBEHC18色谱柱（100mm×2.1mm，3.5μm),或相当者；

b)柱温：30℃;

c)进样量：5μL；

d)流速：0.25mL/min；

e)流动相A：0.1%-甲酸水溶液（5.2.1），流动相B：乙腈（5.1.2）。梯度洗脱条件见表1。

表1流动相及梯度洗脱条件

时间t/min

流动相A(%)

流动相B(%)

0.00

50

50

2.00

45

90

2.40

10

90

3.00

10

50

4.00

60

50

7.4.2质谱参考条件

a)离子源：电喷雾离子源（ESI）；

b)扫描方式:正离子扫描；

c)检测方式：多反应离子监测（MRM）；

d)脱溶剂气、碰撞气均为高纯氮气或其它合适气体;

e)破碎电压、碰撞能等参数应优化至最优灵敏度；

f)监测离子参数情况见表2。

表2离子参数表

化合物

母离子m/z

子离子m/z

破碎电压V

碰撞能eV

双丙环虫酯

594.3

202.1a

135

58

149.0

135

0

a为定量碎片离子。

7.5定性与定量测定

7.5.1定性测定

在同样测试条件下，试样中双丙环虫酯组分的保留时间与标准溶液中双丙环虫酯的保留时间之比，偏差在±2.5%以内，且检测到的相对离子丰度，应当与浓度相当的校正标准溶液相对丰度一致。其允许偏差