酶的生产条件的优化以及常用酶的应用.ppt

当易利用基质不存在或用完后，随着细胞中ATP浓度的下降，而使ADP，AMP，cAMP的浓度增加。当cAMP-CRP的浓度增加到一定量的时候，cAMP-CRP复合物结合到启动基因的特定位点上，RNA聚合酶也随着结合到它的位点上，酶的生物合成就有可能进行。第30页，共60页，星期日，2025年，2月5日2）酶生物合成的诱导作用无诱导物时，阻抑蛋白与操纵基因的结合较强，启动基因上的RNA聚合酶无法进入结构基因上转录，酶不能合成。有诱导物时，诱导物与阻抑蛋白结合，阻抑蛋白的结构改变，不能与操纵基因结合，RNA聚合酶可进行转录生成mRNA，再进一步翻译成酶蛋白多肽链。第31页，共60页，星期日，2025年，2月5日3）酶生物合成的反馈阻遏作用当没有共阻遏物（酶催化产物或途径的末端产物）时，阻抑蛋白不能与操纵基因结合，启动基因上的RNA聚合酶能顺利通过操纵基因位置，结构基因进行转录，进而合成酶蛋白多肽链。当有共阻遏物时与阻抑蛋白特异结合形成完全阻遏物，与操纵基因的亲和力增强，阻止RNA聚合酶通过，结构基因无法转录，酶合成受阻。第32页，共60页，星期日，2025年，2月5日四、酶生物合成的模式细胞生长过程：调整期、生长期、平衡期和衰退期等4个阶段比较细胞生长与酶产生的关系,酶生物合成的模式分为：同步合成型、延续合成型、中期合成型和滞后合成型。第33页，共60页，星期日，2025年，2月5日1、同步合成型酶的生物合成与细胞生长同步进行。酶的合成速度与细胞生长速度紧密联系，又称为生长偶联型。属于该合成型的酶，细胞进入旺盛生长期时，酶大量生成；当细胞生长进入平衡期后，酶的合成随着停止。细胞浓度mg/ml酶浓度U/ml总细胞浓度活细胞浓度胞外酶浓度胞内酶浓度大部分组成酶的生物合成属于同步合成型，有部分诱导酶也按照此种模式进行生物合成。例如米曲霉在含有单宁或者没食子酸的培养基中生长，在单宁或没食子酸的诱导作用下，合成单宁酶（tanaseEC3.1.1.20）。第34页，共60页，星期日，2025年，2月5日2、延续合成型酶的生物合成在细胞的生长阶段开始，在细胞生长进入平衡期后，酶还可以延续合成一段较长时间。属于该类型的酶可以是组成酶，也可以是诱导酶。例如，在黑曲霉在以半乳糖醛酸或果胶为单一碳源的培养基中培养，可以诱导聚半乳糖醛酸酶（Polygalacturonase，EC3.2.1.15）的生物合成。细胞浓度mg/ml酶浓度U/ml细胞浓度mg/ml酶浓度U/ml以半乳糖醛酸为诱导物以含有葡萄糖的果胶为诱导物第35页，共60页，星期日，2025年，2月5日3、中期合成型该类型的酶在细胞生长一段时间以后才开始，而在细胞生长进入平衡期以后，酶的生物合成也随着停止。细胞浓度mg/ml酶浓度U/ml例如，枯草杆菌碱性磷酸酶（Alkalinephophatase，EC3.1.3.1)的生物合成模式属于中期合成型。由于该酶的合成受到其反应产物无机磷酸的反馈阻遏，而磷又是细胞生长所必不可缺的营养物质，培养基中必须有磷的存在。在细胞生长的开始阶段,培养基中的磷阻遏碱性磷酸酶的合成，只有当细胞生长一段时间，培养基中的磷几乎被细胞用完（低于0.01mmol/L）以后，该酶才开始大量生成。又由于碱性磷酸酶所对应的mRNA不稳定，其寿命只有30min左右，所以当细胞进入平衡期后，酶的生物合成随着停止。第36页，共60页，星期日，2025年，2月5日4、滞后合成型此类型酶是在细胞生长一段时间或者进入平衡期以后才开始其生物合成并大量积累。又称为非生长偶联型。许多水解酶的生物合成都属于这一类型。酶合成受到培养基中存在的阻遏物的阻遏作用。只有随着细胞的生长，阻遏物几乎被细胞用完而使阻遏解除后，酶才开始大量合成。若培养基中不存在阻遏物，该酶的合成可以转为延续合成型。该类型酶所对应的mRNA稳定性很好，可以在细胞生长进入平衡期后的相当长的一段时间内，继续进行酶的生物合成。黑曲霉羧基蛋白酶生物合成放线菌素D对产酶的影响细胞浓度mg/ml酶浓度U/ml酶浓度U/ml酶浓度U/ml30℃22℃不加加入不加加入第37页，共60页，星期日，2025年，2月5日5、理想的酶合成模式mRNA稳定性好的，平衡期以后继续合成酶；不受阻遏物影响；生产中，最理想的合成模式应是延续合成型。同步合成型要尽量提高其对应的mRNA的稳定性，为此适当降低发酵温