食品安全标准 果蝇伴性隐性致死试验.docxVIP

中华人民共和国国家标准

犌B15193．11—2015

食品安全国家标准

果蝇伴性隐性致死试验

2015-08-07发布

2015-10-07实施

中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会

发布

Ⅰ

犌B15193．11—2015

前言

本标准代替GB15193．11—2003《果蝇伴性隐性致死试验》。

本标准与GB15193．11—2003相比，主要变化如下：

—标准名称修改为“食品安全国家标准果蝇伴性隐性致死试验”；

—修订了“范围”中受试物的具体内容：本标准适用于评价受试物的遗传毒性作用；—增加了“术语和定义”、“试验报告”和“结果解释”；

—修订了“原理”中的部分内容。

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犌B15193．11—2015

食品安全国家标准

果蝇伴性隐性致死试验

1范围

本标准规定了果蝇伴性隐性致死试验的基本技术要求。

本标准适用于评价受试物的遗传毒性作用。

2术语和定义

2．1致死突变

基因组中发生的一种改变，当它表达时，引起携带者死亡。

2．2隐性突变

只在纯合子或半合子条件下被表达的基因组中的一种改变。

2．3伴性基因

存在于性染色体(X或Y)上的基因。在此仅指位于X染色体上的基因。

3试验目的和原理

隐性基因在伴性遗传中具有交叉遗传特征，即雄蝇的X染色体传给F1代雌蝇，又通过F1代雌蝇传给F2代雄蝇。位于X染色体上的隐性基因在F1代雌蝇为杂合性，不能表达，而能在半合型F2代雄蝇表现出来。据此，利用眼色性状由X染色体上的基因决定，并与X染色体的遗传相关联的特征来作为观察在X染色体上基因突变的标记，故以野生型雄蝇(红色圆眼，正常蝇)染毒，与Basc(Muller-5)雌蝇(淡杏色棒眼，在两个X染色体上各带一个倒位以防止F1代把处理过的父系X染色体和母系X染色体互换)交配，如雄蝇经受试物处理后，在X染色体上的基因发生隐性致死，则可通过上述两点遗传规则于F2代的雄蝇中表现出来，并籍眼色性状为标记来判断试验的结果。即根据孟德尔分类反应产生四种不同表型的F2代，有隐性致死时在F2代中没有红色圆眼的雄蝇。

4仪器和试剂

4．1仪器

电热恒温干燥箱、生化培养箱、立体解剖显微镜、放大镜、空调机、麻醉瓶、果蝇培养管、试管盘及架、白瓷板、海绵垫、毛笔、海绵塞。

果蝇饲养用具洗净后于120℃干燥消毒2h后备用。

4．2试剂

乙酷、75％乙醇、丙丽、吐温。

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4．3培养基的制备

4．3．1蔗糖26g、酵母粉4g，加水150mL。

4．3．2玉米粉34g、酵母粉4g，加水150mL。

4．3．3步骤：先将4．3．1所述的培养基成分混合煮沸溶解后，再将4．3．2的成分依次倒入混匀、煮沸，最后加丙酸2mL，搅匀，分装于果蝇培养管内，备用。

5试验方法

5．1受试物

受试物应溶解或悬浮于合适的溶媒中，溶媒应为无毒物，不与受试物发生化学反应。首选溶媒为水，不溶于水的受试物可使用植物油(如橄榄油、玉米油等)，不溶于水或油的受试物可使用赖甲基纤维素、淀粉等配成混悬液或糊状物等，然后在给样前用蔗糖水稀释。受试物应新鲜配制，有资料表明其溶液或混悬液储存稳定者除外。

5．2实验动物

黑腹果蝇。雄蝇用3日龄~4日龄的野生型黑腹果蝇(DroSophilaMelanogaSter)，雌蝇用Basc (Muller-5)品系3日龄~5日龄的处女蝇。观察2d~3d有无卵或早龄幼虫孵出，以检查是否有非处女蝇混入。

5．3剂量

按常规方法求出果蝇LC50或LD50值。然后按1／2LC50或LD50为高剂量，1／4LD50为中剂量，1／8LD50为低剂量，另设阴性(或溶媒)及阳性[2mmol／L甲基甲烧礦酸酷(MMS)]对照组。如果受试物毒性较小，受试物加入培养基的最大剂量可占培养基的5％。阳性对照物可用甲基礦酸乙酷、甲基礦酸甲酷、N-亚硝基二甲股。

5．4试验步骤和观察指标

5．4．1接触受试物

受试物接触方法为经口给予。新配制的培养基冷却到55℃时，倒入受试物，快速磁搅拌2min，放入经饥饿4h的雄蝇进行喂饲，接触受试物时间3d。

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