药物分析课件：生物碱类药物的分析.pptVIP

*************************************生物碱的含量测定（3）沉淀试剂选择根据目标生物碱的特性选择合适的沉淀试剂，如碘化铋钾、硅钨酸、磷钨酸等。理想的沉淀试剂应能与目标生物碱形成化学计量比明确、溶解度小、纯度高的沉淀。沉淀形成与分离控制适宜的反应条件（pH值、温度、反应时间等）促进沉淀完全形成。使用玻璃砂坩埚或定量滤纸过滤沉淀，用适当溶剂洗涤除去杂质。要确保沉淀完全转移和充分洗涤，避免沉淀损失或残留杂质。干燥与称重将沉淀在适当温度下干燥至恒重（通常80-105℃），冷却后精确称重。根据沉淀的化学计量比和分子量，计算样品中生物碱的含量。重量法的准确性高度依赖于沉淀的纯度和化学计量比的确定性。重量法是早期用于生物碱含量测定的经典方法，基于生物碱与特定试剂形成难溶性沉淀的原理。虽然方法简单，但受多种因素影响，如沉淀的溶解度、纯度、化学计量比的确定性等，现已较少使用。然而，在某些特定条件下，如分析设备有限或需要进行方法学验证对比时，重量法仍有一定应用价值。生物碱的含量测定（4）波长(nm)吗啡吸光度可待因吸光度罂粟碱吸光度分光光度法是常用的生物碱含量测定方法，基于生物碱分子在紫外或可见光区的特征吸收。大多数生物碱由于分子中含有共轭双键或芳香环结构，在紫外区有特征吸收峰，如吗啡在285nm、奎宁在250nm和315nm、咖啡因在273nm有最大吸收。测定时，制备适宜浓度的样品溶液，在特征波长处测定吸光度，根据朗伯-比尔定律计算含量。某些生物碱本身在可见光区无显著吸收，可通过显色反应转化为有色化合物后测定。如阿托品与呋喃反应生成的紫红色化合物可在545nm处测定；小檗碱在酸性条件下显黄色，可直接在420nm处测定。分光光度法操作简便，设备要求低，适用于多种生物碱的含量测定，是药典中常用的分析方法。生物碱的含量测定（5）荧光特性许多生物碱具有内源性荧光，如奎宁、罂粟碱、荭草碱等，可直接进行荧光测定。不具有内源性荧光的生物碱可通过衍生化反应转化为荧光化合物后测定。荧光分析的灵敏度比紫外分光光度法高2-3个数量级，检测限可达ng/mL甚至pg/mL水平，特别适合微量组分的测定。测定条件优化荧光分析需要优化多项条件，包括激发波长、发射波长、狭缝宽度、光电倍增管电压、响应时间等。此外，溶剂极性、pH值、温度、氧气含量等环境因素也会影响荧光强度。例如，奎宁的荧光强度在pH为5-7时最强；咖啡因在酸性条件下与次甲蓝形成的复合物具有强荧光。应用案例荧光分析法已广泛应用于多种生物碱的含量测定。如以350nm激发、450nm发射波长测定奎宁；用315nm激发、425nm发射波长测定罂粟碱；秋水仙碱与荧光试剂反应后，以250nm激发、370nm发射波长测定。现代荧光分析技术如三维荧光光谱、同步荧光光谱和激光诱导荧光等，进一步提高了分析的选择性和灵敏度。生物碱的含量测定（6）1高效液相色谱法（HPLC）HPLC是当前最常用的生物碱含量测定方法，具有高效、快速、灵敏度高等优点。典型色谱条件：C18反相柱（150mm×4.6mm，5μm），以甲醇或乙腈与缓冲液为流动相，流速为1.0mL/min，紫外或二极管阵列检测器检测。HPLC可同时分离测定多种生物碱，特别适合复杂样品分析，如中药材、制剂中多组分生物碱的含量测定。2超高效液相色谱法（UHPLC）UHPLC采用粒径小于2μm的填料和高压系统，分离效率比传统HPLC提高5-10倍，分析时间显著缩短。例如，传统HPLC分析罂粟碱类生物碱需要15-20分钟，而UHPLC只需2-3分钟即可完成。UHPLC还具有样品和溶剂消耗少、灵敏度高等优点，是生物碱分析的发展趋势。3气相色谱法（GC）GC适用于分析挥发性或经衍生化处理后可挥发的生物碱。通常采用毛细管柱，氢火焰离子化检测器、氮磷检测器或质谱检测器检测。GC分离效率高，特别适合分析异构体。如通过GC分离测定麻黄碱、伪麻黄碱的含量，或测定中药材中挥发性生物碱的含量。许多生物碱需要经过硅烷化、酰化等衍生化处理后才能进行GC分析。生物碱的含量测定（7）1伏安法许多生物碱分子中含有易氧化或还原的官能团，如酚羟基、醌类结构、硝基等，可在电极表面发生电化学反应，产生氧化还原电流。通过测量电流与电位的关系（伏安曲线），可进行定性和定量分析。常用的伏安法包括示差脉冲伏安法、方波伏安法等，灵敏度高，检测限可达10??mol/L水平。2安培法在固定电位下测量生物碱氧化还原反应产生的电流，电流大小与生物碱浓度成正比。安培法通常与流动系统（如流动注射分析、液相色谱）联用，形成电化学检测器。安培检测器响应快速，灵敏度高