重组DNA技术的基本工具（课时1）课件-高二下学期生物人教版选择性必修3.pptx

知识点1;BT毒蛋白基因;知识点1;思考1、苏云金芽孢杆菌的基因为什么可以在棉花中表达？;【笔记】两段DNA可以拼接的原因：自然界中的DNA分子有以下3点共性

（1）DNA的基本组成单位相同

(都是四种脱氧核苷酸)

（2）都遵循碱基互补配对原则

（3）双链DNA分子的空间结构都是

规则的双螺旋结构;（1）元素组成：__________________;（4）脱氧核苷酸长链;【回顾】;知识点2;基因工程的分子工具（一）

限制性内切核酸酶——“分子手术刀”;自主学习：

1、基因工程中用到的限制性核酸内切酶从何处获取？有什么作用？

2、它的化学本质是什么？作用结果是什么？作用特点是什么？;1、别称：

2、来源：;原核生物容易受到自然界外源DNA的入侵，所以它在长期的进化过程中形成了一套完善的防御机制。限制酶是细胞的一种防御性工具。当原核细胞遭到外源DNA入侵时，它会利用限制酶来切割外源DNA，使之失效。;5、作用:;例、EcoRI酶切示意图;识别双链DNA分子的特定核苷酸序列特征：两条链从5`→3`的碱基顺序相同。;回文诗《万柳堤即景》;限制性核酸内切酶完成识别后如何“切开”？断裂的化学键名称是？;例、EcoRI酶切示意图;例1、据下图分别写出BglⅡ与BamHⅠ酶切后形成的黏性末端为、。;例2、判断两个黏性末端是否为同一种限制酶切割产生;1、别称：

2、来源：;p75;基因工程的分子工具（二）

DNA连接酶——“分子缝合针”;（二）DNA连接酶——“分子缝合针”;1、作用：;分析1：黏性末端和平末端的连接效率有差异原因是什么？;【回顾】;【比较】DNA聚合酶与DNA连接酶;【笔记】DNA聚合酶与DNA连接酶;名称;基因工程的分子工具（三）

基因进入受体细胞的载体——“分子运输车”;为什么需要载体？直接将目的基因导入受体细胞可以吗？;1、作用：;（1）常用载体：质粒;质粒;例、下图表示四种质粒，其中箭头所指部位为限制酶的识别位点，质粒的阴影部分表示标记基因。适合作为载体的质粒是哪一种？说明理由。

答案：适合作为载体的质粒是①。由图可知，质粒②上无标记基因，不适合作为载体；质粒③和④的标记基因上都有限制酶的识别??点，使用该酶后将会破坏标记基因，故均不宜选作载体。;变式、下面是四种不同质粒的示意图，其中ori为复制必需的序列，AmpR为氨苄青霉素抗性基因，TetR为四环素抗性基因，箭头表示同一种限制性内切核酸酶的酶切位点。若要得到一个能在四环素培养基上生长而不能在氨苄青霉素培养基上生长的含重组DNA的细胞，应选用的质粒是();;;【小结】载体需要具备的条件（以质粒为例）;深度思考：使用DNA连接酶后是否一定能将目的基因与载体成功连接？尝试分析影响连接的因素。;笔记：连接失败的原因：

①末端不匹配、②酶失活、③温度不当（通常需16°C）、

④载体环化、⑤质粒环化、

⑥目的基因与质粒反向连接，造成目的基因不能正确表达。;双酶切;笔记：连接失败的原因：

①末端不匹配、

②酶失活、

③温度不当（通常需16°C）、

④载体环化、

⑤质粒环化、

⑥目的基因与质粒反向连接，

造成目的基因不能正确表达。;P73;根据图中的相关信息找到两条片段上EcoRI的识别序列和切割位点。然后，用剪刀进行“切割”。待切割位点全部切开后，将从下面那条DNA链上切下的片段重组到上面那条DNA链的切口处，并用透明胶条将切口粘连起来。;讨论2：你制作的黏性末端的碱基能不能互补配对？如果不能，可能是

什么原因造成的？;【小结】基因进入受体细胞的载体——“分子运输车”;【总结】