T_CACM 1027.203-2021 法半夏配方颗粒PCR鉴别.docx

ICS11.020CCSC10

团体标准

T/CACM1027.203—2021

法半夏配方颗粒PCR鉴别

PCRidentificationofFabanxiapeifangkeli

2021-11-29发布2021-11-29实施

中华中医药学会发布

T/CACM1027.203—2021

I

目次

前言 II

1范围 1

2规范性引用文件 1

3术语和定义 1

4仪器设备 1

5试剂试药 1

6鉴别引物序列 1

7检验程序 2

7.1基本要求 2

7.2取样 2

7.3DNA提取 2

7.4PCR扩增 2

7.5扩增产物检测 3

8结果判定 3

9结果报告 3

9.1一般要求 3

9.2检测报告 3

10质量保证 3

11废弃物处理 4

附录A（规范性）检测用仪器设备和试剂试药 5

附录B（资料性）法半夏配方颗粒PCR反应体系的建立 7

参考文献 10

T/CACM1027.203—2021

II

前言

本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。

请注意本文件中的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。

本文件由中国中医科学院中药资源中心提出。

本文件由中华中医药学会归口。

本文件起草单位：中国中医科学院中药资源中心、华润三九医药股份有限公司、安徽省食品药品检验研究院、浙江省中医院、成都中医药大学附属医院、安徽华润金蟾药业股份有限公司、华润三九（雅安）药业有限公司。

本文件主要起草人：袁媛、张辉、蒋超、张亚中、蒲婧哲、胡冲、郑敏霞、郑琰、高波、吴建国。

T/CACM1027.203—2021

1

法半夏配方颗粒PCR鉴别

1范围

本文件规定了使用聚合酶链式反应（PCR）鉴别法半夏配方颗粒的通用方法和要求。

本文件适用于法半夏配方颗粒的鉴别。

本文件不适用于正伪混合样品的鉴定。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注明日期的引用文件，其必威体育精装版版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

GB/T27403实验室质量控制规范食品分子生物学检测

T/CACM1027.2—2016中药分子鉴定通则第2部分：中药提取物与中成药

中华人民共和国药典（四部）

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1

法半夏配方颗粒fabanxiapeifangkeli

为天南星科植物半夏Pinelliaternate(Thunb)Breit.的干燥块茎经炮制并按标准汤剂的主要质量指标加工制成的配方颗粒。

4仪器设备

仪器设备应符合附录A的要求。

5试剂试药

试剂试药应符合附录A的要求。

6鉴别引物序列

BX-123aF：5-CGGCGGAGGCACGCAAT-3

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2

BX-123R：5-AATTCACACCACGTATCGCATTT-3

7检验程序

7.1基本要求

为防止交叉污染，收样、取样、粉碎、DNA提取和核酸扩增与产物检测应在不同操作间或在同一操作间不同隔离区域进行，进入各区域应严格按照单一方向进行，即样品制备区核酸制备区扩增区

检测区。

7.2取样

送检样品总量应不低于10g，每批分为3等份，1/3供实验室分析用，另1/3供复核用，其余1/3留样保存。收样时应检查包装的完整性，并在样品袋上贴上标签，填写采集数据表。对商品包装和送样说明进行拍照记录，照片随样品一起备档。送检样品抽样方法依照《中华人民共和国药典》（四部）通则0211进行取样。

7.3DNA提取

送检样品DNA提取步骤如下：

a)取样品1g，粉碎成粉末；

b)取上述粉末0.02g，置2mL离心管中，加入细胞核裂解液300μL、乙二胺四乙酸二钠溶液50μL、蛋白酶K溶液20μL、RNA酶A溶液5μL，充分涡旋震荡混匀3min，56℃下水浴60min；

c)离心（12000×g）5min后，吸取上