水稻核辐射靶向基因突变筛选技术规程地方标准.docx

ICS65.020CCSB30

43

湖南省地方标准

DB43/T3133—2024

水稻核辐射靶向基因突变筛选技术规程

Codefortargetedmutationgenescreeningtechniquesonricebynuclear-radiation

2024-12-31发布2025-03-31实施

湖南省市场监督管理局发布

DB43/T3133—2024

I

目次

前言 II

1范围 1

2规范性引用文件 1

3术语和定义 1

4原理 1

5核辐射诱变源及材料 2

6仪器设备及试剂盒 2

7操作步骤 2

8植株材料编号 3

9突变体档案 3

附录A（资料性）文库构建与突变体筛选的反应体系和程序 4

DB43/T3133—2024

II

前言

本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定

起草。

请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由湖南省农业农村厅提出。

本文件由湖南省农业标准化技术委员会归口。

本文件起草单位：湖南省核农学与航天育种研究所、华智生物技术有限公司。

本文件主要起草人：杨震、张莉、张逸妍、吕思维、张渊海、李文革、张勇、彭妙、彭选明、唐顺学、吴云天、陈哲红。

DB43/T3133—2024

1

水稻核辐射靶向基因突变筛选技术规程

1范围

本文件规定了水稻核辐射靶向基因突变筛选技术的原理、诱变源及材料、仪器设备以及操作步骤等内容。

本文件适用于采用核辐射诱变水稻种子获得靶向基因突变体。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T4404.1粮食作物种子第1部分：禾谷类

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1

核辐射atomradiation

原子核从一种结构或一种能量状态转变为另一种结构或另一种能量状态过程中所释放出来的微观粒子流。核辐射一般分为粒子辐射和电磁辐射两大类，包括α粒子、β粒子、γ射线、X射线、中子、质子、电子、离子束等。

3.2

最适辐射剂量optimalradiationdosage

辐射当代幼苗期，苗高较对照降低50%时的辐射剂量。

3.3

诱变群体mutantpopulation

指通过物理或化学诱变剂处理，人为诱导基因突变所获得的生物群体。

3.4

靶向筛选targetedscreening

根据靶向基因序列设计分子探针，与基因组文库杂交捕获，对捕获片段PCR扩增，测序获得靶向基因的突变位点信息。

4原理

采用物理诱变源辐射水稻干种子，将M2代群体制备成多个DNA混池，分别构建DNA文库；根据靶向基因序列设计分子探针，将探针与DNA文库进行杂交；采用磁珠富集杂交后的产物，构建富集文库；对富集文库进行鉴定分析，筛选出与靶向基因序列有差异的DNA混池；对混池内各单株进行靶向基因测序，获得靶向基因突变单株。

DB43/T3133—2024

2

5核辐射诱变源及材料

5.1诱变源

可采用α粒子、β粒子、γ射线、中子、质子、电子、离子束等物理诱变源。

5.2主要材料

水稻干种子，质量应符合GB/T4404.1。

6仪器设备及试剂盒

6.1仪器设备

主要包括组织研磨仪、高速冷冻离心机、核酸浓度测定仪、水浴锅、PCR扩增仪、琼脂糖凝胶电泳仪、水平电泳槽及制胶附件、凝胶成像系统、MiniSeq500测序仪、Serapure磁珠。

6.2试剂盒

主要包括DNA提取试剂盒、文库构建试剂盒、扩增试剂盒、杂交试剂盒、测序试剂盒等。

7操作步骤

7.1诱变材料的选择

选择综合性状优良、遗传稳定性好的纯系自交品种，针对育种目标性状进行靶向基因突变的筛选。

7.2最适辐射剂量

γ射线300Gy～350Gy，12C+6离子束120Gy～150Gy，电子束是300Gy～350Gy，中子12Gy~

20Gy、质子150Gy～200Gy。

7.3辐射诱变材料群体的获取与靶向变