高抗性淀粉马铃薯抗性淀粉含量指标和检测方法编制说明.docxVIP

团体标准

《高抗性淀粉马铃薯抗性淀粉含量指标和

检测方法》

编制说明

二。二二年三月一日

离心机

酶标仪(可用96孔酶标板，510nm)

容量瓶(100mL,1000mL,500mL,250mL)

移液器(1mL,10gl,200gl)

磁力搅拌器

全自动水份测定仪

4.5分析步骤

试样准备

A.干样或干制品

.用旋风磨磨碎，过150|im筛子，混匀后保存于自封袋中密封备用。

.利用全自动水份测定仪或根据GB/T5497测定试样中水份。

.鲜样

.鲜薯洗净去皮，吸干外表水份切小块备用。或者马铃薯切薄片，冷冻干燥(至少48h)或普通烘箱烘干；

.冷冻干燥样品用旋风磨磨碎，过150|im筛子，混匀后保存于自封袋中密封备用。

.鲜样根据GB/T5497测定试样中水份

.5.2测定

水解非抗性淀粉

(1)准确称取样品100±5mg干样至15mL带盖螺旋圆底离心管中，轻轻敲打试管以使样品位于底部；

(2)加入500pL蒸僧水于各试管中，等电饭煲中的水沸腾后放入，蒸煮

20min,然后保温10min；

(3)取出试管，等试管冷却至室温时，加入2mLKC1-HC1溶液C4.2.2.6),利用手持式匀浆机(最小档，40s)将样品捣碎；

(4)加入100、L胃蛋白酶(4.2.2.11),置于漩转摇床37。(2消化lh；

(5)加入4mL马来酸钠缓冲液混匀，然后加入4mLa-胰淀粉酶(4.2.2.10),混匀；

(6)旋紧试管盖，置于旋转摇床(20转/min),于37。(2消化过夜(16h)；

(7)取出试管，4000rpm(1500g)离心10min;

io

(8)小心去除上清液，然后加入2mL50%乙醇，旋涡振荡，将沉淀充分重

悬，然后再加入6mL50%乙醇，混匀，4000rpm离心10min；

(9)小心去除上清并重复重悬离心两次；

(10)小心去除上清液，倒置试管去除多余水分，并用滤纸将试管壁上多余水分小心吸去；

452.2抗性淀粉测定

(1)在每个试管中加入1mL水，将沉淀充分重悬，然后再加入1mL4MKOH溶液(4.224),轻轻混匀后，置冰水浴中振荡20min；

(2)每个试管中加入8mLi.2M醋酸钠缓冲液(4.222),混匀后,立即加入0.1mL3300U的AMG(422.8),混匀后置水浴摇床，50℃30min,期间取出两次混匀；

(3)取出试管，擦干试管外表水份，4000rpm离心10min；

(4)吸取10匹上清液至96孔板中，加入190|iLGOPOD试剂(试剂盒)；

(5)葡萄糖标准曲线制备：吸取0,1,3,5,7,9,lOpLlmg/mL葡萄糖标准试剂至96孔板中，缺乏10pL的分别用0.1M醋酸钠溶液(4.223)补足至10匹,力口入190|1LGOPOD试剂；

(6)50。(2温育20min后，冷却，利用酶标仪测定510nm处吸光值；

结果计算

根据葡萄糖标准样品绘制标准曲线，根据标准曲线方程计算试样中的葡萄糖溶液，然后根据以下公式计算RS含量：

162100

RS,g/100g#^=Cxl0.3x—X—

式中：

C 一根据标准曲线得出的葡萄糖浓度(mg/mL)

10.3 —试样体积(mL)

162/180—葡萄糖淀粉转化系数

精度

两次独立测定结果标准误差不大于平均值的10%0

五、主要试验(或验证)的分析、综合报告，技术经济论证，预期的

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经济效果

(-)中国马铃薯抗性淀粉含量情况分析

马铃薯在世界各地广泛种植，每年全球产量为3.68亿吨，其中我国马铃薯产量占比约四分之一，位居世界首位。目前马铃薯与小麦、水稻、玉米一起被称为世界四大农产品，也是世界五大农作物之一。2015年农业部提出推进马铃薯主粮化的战略思想。目前，有关马铃薯抗性淀粉的研究主要集中于利用马铃薯淀粉进行加工产生抗性淀粉，但有关马铃薯品种抗性淀粉检测极少，而有关高抗性淀粉马铃薯品种培育栽培种植的相关研究基本没有。闫巧珍(2018)对马铃薯全粉、小麦全粉和米粉进行消化特性分析，发现马铃薯全粉的RS含量显著低于小麦粉和米粉。徐箸等(2020)年对豌豆、马铃薯等7种淀粉的GI进行分析，发现马铃薯淀粉的GI为70.3,仅低于大米淀粉。刘爽等(2021)对张家口地区7个马铃薯品种进行消化特性分析，发现大西洋薯抗性淀粉含量占总淀粉13.79%。

本团队已有近20年的抗性淀粉方面的研究，本课题组利用诱变技术，并培育出首个高RS含量的早釉稻浙辐201及第一次优质高抗性淀粉淀粉水稻“浙大两优宜糖釉1号”2020年通过了浙江省品种审定委员会审定。使用改良的抗性淀粉提取方法对216份马铃薯材料进行了精确定量检测，结