高效液相色谱.ppt

二、根据溶解性选择水溶性样品最好用离子交换色谱法和液-液分配色谱法；微溶于水，但在酸或碱存在下能很好电离的化合物，也可用离子交换色谱法；油溶性样品或相对非极性的混合物，可用液-固色谱法。三、根据分子结构选择若样品中包含离子型或可离子化的化合物，或者能与离子型化合物相互作用的化合物（例如配位体及有机螯合剂），可首先考虑用离子交换色谱，但空间排阻和液-液分配色谱也都能顺利地应用于离子化合物；异构体的分离可用液-固色谱法；具有不同官能团的化合物、同系物可用液-液分配色谱法；对于高分子聚合物，可用空间排阻色谱法。第61页，共99页，星期日，2025年，2月5日书中所列的各类化合物使用的是什么色谱法，何种色谱柱及检测器？§4-8HPLC的应用第62页，共99页，星期日，2025年，2月5日1.环境中有机氯农药残留量分析固定相：薄壳型硅胶(37～50?m)流动相：正己烷流速：1.5mL/min色谱柱：50cm?2.5mm(内径)检测器：示差折光检测器可对水果、蔬菜中的农药残留量进行分析。第63页，共99页，星期日，2025年，2月5日2.稠环芳烃的分析——稠环芳烃多为致癌物质。固定相：十八烷基硅烷化键合相流动相：20%甲醇-水~100%甲醇线性梯度淋洗，2%/min流速：1mL/min柱温：50oC柱压：70?104Pa检测器：紫外检测器第64页，共99页，星期日，2025年，2月5日§4-9制备型液相色谱仪

preparativeliquidchromatography获得高纯物质（色谱纯）的有效方法。半制备柱(内径8mm，长度15~30cm)，一次制备量０.1~１mg。1.色谱柱的柱容量（柱负荷）对分析柱：不影响柱效时的最大进样量；对制备柱：不影响收集物纯度时的最大进样量；超载：进样量超过柱容量。柱效迅速下降，峰变宽。超载可提高制备效率，以柱效下降一半或容量因子k降低10%为宜。第65页，共99页，星期日，2025年，2月5日2.液相制备色谱的方法收集组分时，通常有以下情况：（1）可获得良好分离，主峰使用制备柱，超载提高效率；（2）两主成分之间的小组分；超载，分离切分使待分离组分成为主成分（富集）后，再次分离制备。第66页，共99页，星期日，2025年，2月5日第67页，共99页，星期日，2025年，2月5日第68页，共99页，星期日，2025年，2月5日3.制备型液相色谱仪制备型液相色谱仪：结构与分析型一样，但泵流量大、进样量大、采用制备柱；柱后馏分收集器。制备柱：内径20～50mm，柱长50cm。第69页，共99页，星期日，2025年，2月5日一、高效毛细管电泳基本原理电泳：电解质溶液中的带电离子在电场力的作用下，以不同的速度向其所带电荷相反的电极方向迁移的现象，称之为电泳。毛细管电泳：以高压电场为驱动力，以毛细管为分离通道，依据试样中各组分之间淌度和分配行为上的差异而实现分离、分析物质的一类液相技术，是经典电泳和现代微柱分离的结合。§4-10高效毛细管电泳第70页，共99页，星期日，2025年，2月5日1）多孔型：聚苯乙烯+二乙烯苯交联，分微孔型和大孔型。交换基团多——交换容量大，稳定。但易溶胀，传质慢、柱效低、分析速度慢。2）表面多孔型：?薄膜型=惰性核+树脂薄层(1-2?m)?多孔型=惰性核+硅胶微球+树脂薄层。克服了多孔型离子交换树脂的不足，但交换容量低，柱子易超负荷。3）离子交换键合相：利用化学反应将离子交换基团键合到惰性载体表面。载体可以是薄壳玻珠，也可以是多孔硅胶微粒。使用后者为载体，可得到性能稳定、耐压、高柱效的柱子。微孔型大孔型微孔微孔薄膜型表面多孔型离子交换层惰性核惰性核离子交换剂硅胶层涂覆第29页，共99页，星期日，2025年，2月5日3.流动相离子交换色谱流动相为盐类缓冲溶液(有一定pH和离子强度。pH值：影响酸或碱的离解平衡，控制组分离子形式所占的分数。当组分以分子形式存在时，则不被保留；离子分数越高，保留值越大。常用的有柠檬酸盐、磷酸盐、甲