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T细胞亚群的检测—免疫荧光法

【申请单】请完成申请单所要求项目

×××市人民医院检验申请单

姓名

性别年龄

门诊号住院号

诊断或症状

检验标本

检验目的

送检科室医师

送检日期年月日

【方法选择】

表1-1T细胞亚群的检测方法

方法流式细胞术免疫荧光法AP-AAP桥联酶免疫法

√

本次检查选择

【材料准备】

1.抗CDMcaB、兔抗鼠IgG荧光抗体。

2.受检者肝素（或EDTA）抗凝静脉血。

3.含10％胎牛血清的RPMI1640培养液。

4.细胞分离液。

5.细胞计数板。

6.离心机、落射荧光显微镜。

操作方法

【】

1.取肝素抗凝血1.5ml，与等量生理盐水混匀，轻轻叠加在3ml细胞分离液上，转速

2000r/mi离心，离心时间20mi。吸取单个核细胞层（PBMC），用RPMI1640培养液洗涤，

6

1000r/mi离心2次，每次10min.弃上清，加入RPMI1640培养液，配成5×10/ml细胞悬液。

2.按厂家说明稀释抗CDMcaB至工作浓度，取0.1ml，加等量步骤1制好的细胞悬液，

混匀后，4℃下静置45mi。离心弃上清，再用洗2次，弃上清；

3.配制合适浓度兔抗鼠IgG荧光抗体，取0.1ml加入步骤2制好的沉淀细胞中混匀，4℃

下静置30mi，用RPMI1640培养液洗涤，800r/mi离心3mi，共洗3次。吸弃大部分上

清液，混匀沉淀细胞，滴于细胞计数板后荧光显微镜下观察。

【观察结果】

在落射荧光显微镜下进行观察，计数200细胞，以荧光强度≥2为阳性，计算阳性细胞

百分比率。

【注意事项】

1.严格按厂家说明书配置工作浓度试剂。

2.注意控制实验环境温度。

3.按顺序加入试剂，按操作规程进行操作，避免造成误差。

4.检测完毕后应仔细核对、记录、避免笔误。

5.不同的检测方法结果参考值有区别，参考区间为：CD+细胞：（71.56.2）％

3

或65-80％，CD+CD+细胞：45.75.3％，CD+CD+细胞：27.95.0％，

3438

CD+/CD+:1.660.33。

48

6.荧光亮度一般分为4级：①-：荧光不可见或极微弱；②+：仅有可见

荧光；③2+：可见明亮荧光；④3+：可见耀眼荧光。

【报告单】

×××市人民医院检验报告单质评合格，省内参考

检查项目：T细胞亚群的检测采集时间:接收时间:

姓名患者编号标本号报告时间

性别床号送检医师临床诊断

年龄科别标本种类备注：

序号项目结果