沉淀法和吸附法.ppt

3、有机溶剂沉淀实例第31页，共44页，星期日，2025年，2月5日关于沉淀法和吸附法第1页，共44页，星期日，2025年，2月5日(一)盐析法(二)有机溶剂沉淀法(三)等电点沉淀法(四)生成盐复合物沉淀法一、沉淀法第2页，共44页，星期日，2025年，2月5日一、沉淀法沉淀是通过改变条件或加入某种试剂，使溶液中的溶质由液相转变为固相析出的过程。成本低设备简单收率高浓缩倍数高操作简单优点：第3页，共44页，星期日，2025年，2月5日①盐析法:多用于分离纯化各种蛋白质和酶。②有机溶剂沉淀法：多用于生物小分子、多糖及核酸等产品的分离纯化，也有用于蛋白质的沉淀。③等电点沉淀法：用于氨基酸、蛋白质及其他两性物质的沉淀。④生成盐复合物沉淀法：用于多种化合物，特别是小分子物质的沉淀。第4页，共44页，星期日，2025年，2月5日(一)盐析法高浓度的中性盐能破坏蛋白质、酶等的胶体性质，中和微粒上的电荷，促使蛋白质等发生沉淀或絮凝现象。logS＝β-Ks?ⅠS—离子强度为Ⅰ时的蛋白质的溶解度；Ks—盐析常数，与温度和pH无关；β值—是溶质的特征常数，对于蛋白质而言，其大小主要取决于不同蛋白质的性质，它也与溶液的温度和pH值有关，但与盐的种类无关;为便于计算，用盐的摩尔数m代替离子强度I，则logS＝β-Ks?m1、盐析原理第5页，共44页，星期日，2025年，2月5日盐析机理示意图第6页，共44页，星期日，2025年，2月5日第7页，共44页，星期日，2025年，2月5日第8页，共44页，星期日，2025年，2月5日盐离子与蛋白质分子争夺水分子，降低了用于溶解蛋白质的有效水量，减弱了蛋白质的水合程度，破坏了蛋白表面的水化膜，导致蛋白质溶解度下降；盐离子电荷的中和作用，使蛋白质溶解度下降；盐离子引起原本在蛋白质分子周围有序排列的水分子的极化，使水活度降低。第9页，共44页，星期日，2025年，2月5日碳氧血红蛋白的溶解度与硫酸铵离子强度的关系图pH6.6，温度25℃，logS0=17g·L-1第10页，共44页，星期日，2025年，2月5日不同蛋白质的溶解度曲线第11页，共44页，星期日，2025年，2月5日蛋白质的盐析分布曲线第12页，共44页，星期日，2025年，2月5日溶解度曲线(a)和盐析分布曲线(b)第13页，共44页，星期日，2025年，2月5日蛋白质起始浓度的影响高浓度蛋白质溶液可以减少盐的用量，但蛋白质浓度太高，会发生严重的共沉作用。2、影响盐析的主要因素第14页，共44页，星期日，2025年，2月5日无机盐种类的影响不同盐溶液中碳氧血红蛋白的溶解度与离子强度的关系（25℃）

(○)NaCl;(▼)KCl;(?)MgSO4;(▲)NH4SO4;(●)Na2SO4;(□)K2SO4;(■)柠檬酸三钠离子强度越大，蛋白质的溶解度越低。不同蛋白质盐析所需离子强度不同。可用不同的盐浓度将各种蛋白质分别沉淀析出。第15页，共44页，星期日，2025年，2月5日温度的影响升温，可增加许多无机盐和小分子有机物的溶解度。但在高盐浓度中，蛋白质等生物大分子物质的溶解度随温度的升高反而减小。第16页，共44页，星期日，2025年，2月5日pH对β的影响盐析pH的选择要以不降低产物的活性为原则。由于蛋白质在等电点时最易沉淀，可选择等电点的pH作为盐析的pH第17页，共44页，星期日，2025年，2月5日二次盐析第18页，共44页，星期日，2025年，2月5日第19页，共44页，星期日，2025年，2月5日(二)等电点沉淀法是利用两性电解质在电中性时溶解度最低的原理，进行物质分离纯化的方法。中性盐的浓度增加时，相应于最低溶解度的pH值向偏酸方向移动；同时最低溶解度会有所增大。等电点沉淀法应在低离子强度下操作。许多蛋白质的等电点都在偏酸性的范围内。第20页，共44页，星期日，2025年，2月5日(二)等电点沉淀法是利用两性电解质在电中性时溶解度最低的原理进行物质分离纯化的方法。中性盐的浓度增加时，相应于最低溶解度的pH值向偏酸方向移动；同时最低溶解度会有所增大。等电点沉淀法应在低离子强