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CAT2和NCA1原核共表达体系下CAT2酶活性特性探讨.docx

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CAT2和NCA1原核共表达体系下CAT2酶活性特性探讨

CAT2和NCA1原核共表达体系下CAT2酶活性特性探讨（1）．．．．．．．．．．3

研究背景与意义．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．3

1.1原核表达体系的概述．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．3

1.2CAT2和NCA1蛋白的功能与作用．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．4

1.3共表达体系在酶活性研究中的应用．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．5

材料与方法．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．7

2.1原核表达载体的构建．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．8

2.2CAT2和NCA1蛋白的表达与纯化．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．9

2.3酶活性测定方法．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．10

2.4数据分析与统计方法．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．11

CAT2酶活性特性分析．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．12

3.1CAT2酶的活性测定结果．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．14

3.2CAT2酶的动力学参数分析．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．17

3.3CAT2酶的热稳定性研究．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．17

3.4CAT2酶的pH稳定性研究．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．18

NCA1蛋白对CAT2酶活性的影响．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．19

4.1NCA1蛋白对CAT2酶活性影响的实验设计．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．20

4.2NCA1蛋白与CAT2酶相互作用的研究．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．21

4.3NCA1蛋白对CAT2酶活性影响的动力学分析．．．．．．．．．．．．．．．．．．23

共表达体系下CAT2酶活性特性的综合评价．．．．．．．．．．．．．．．．．．．25

5.1CAT2酶在共表达体系中的活性表现．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．26

5.2CAT2酶与NCA1蛋白的相互作用对活性的影响．．．．．．．．．．．．．．．．27

5.3共表达体系对CAT2酶活性的优化策略．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．28

CAT2和NCA1原核共表达体系下CAT2酶活性特性探讨（2）．．．．．．．．．29

一、CAT2和NCA1原核共表达体系概述．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．29

背景介绍．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．30

原核共表达体系选择及构建．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．31

CAT2与NCA1基因的特点及其功能．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．32

二、CAT2酶活性特性的基础分析．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．33

CAT2酶的基本性质．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．34

CAT2酶的催化机制．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．35

CAT2酶的底物特异性．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．36

三、CAT2与NCA1在原核共表达体系中的表达与调控．．．．．．．．．．．．．．37

表达载体的构建与转化．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．38

表达条件的优化．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．39

表达的检测与调控机制．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．40

四、CAT2酶活性特性在原核共表达体系中的探讨．．．．．．．．．．．．．．．．42

共表达体系下CAT2酶活性的测定．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．44

CAT2酶活性与NCA1表达的关系．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．45

不同条件下CAT2酶活性的变化．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．46

五、C

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